[发明专利]一种含干细胞外泌体的雾化剂及其用于治疗肺部疾病的应用

权利要求书

1.一种含干细胞外泌体的雾化剂，其特征在于，包括下述组分：脐带间充质干细胞外泌体1-10μg/mL、脐带多肽10-30μg/mL、黄芪多糖30-50μg/mL、余量为缓冲液。

2.根据权利要求1所述的含干细胞外泌体的雾化剂，其特征在于，所述缓冲液为PBS缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液中的至少一种。

3.一种如权利要求1或2所述的含干细胞外泌体的雾化剂的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

S1、取新鲜脐带经过消毒、清洗后，剔除血管，剪成块状，将得到的组织块依次用胰蛋白酶、胶原酶消化，然后用PBS洗涤，置于培养皿中，加入含10％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5％CO₂培养箱中进行培养，待细胞融合度达到80-90％后，按1:(2-4)的比例进行传代，记为P1代，并收集P1代传代后剩下的组织块；

S2、采用含10％胎牛血清的DMEM培养基对所述P1代细胞传代培养至P3-P5代，待P3-P5代细胞融合度达到80-90％后，去除培养基，用PBS洗涤细胞后，加入DMEM/F12无血清培养基培养20-30h，离心，收集上清液，然后将所述上清液超速离心，收集沉淀，得到脐带间充质干细胞外泌体；

S3、将所述传代后剩下的组织块用PBS洗涤后置于培养瓶中，加入复合酶液进行酶解反应，酶解反应结束后，先高温灭酶，然后冷却、离心，将得到的上清液采用截留分子量为1万的超滤膜进行超滤，收集透过液进行浓缩、冷冻干燥，得到脐带多肽；

S4、分别将脐带间充质干细胞外泌体、脐带多肽和黄芪多糖加入适量缓冲液充分溶解，得到脐带间充质干细胞外泌体溶液、脐带多肽溶液和黄芪多糖溶液，然后将脐带间充质干细胞外泌体溶液、脐带多肽溶液和黄芪多糖溶液按比例混合均匀，加入缓冲液定容至一定浓度，即得。

4.根据权利要求1所述的含干细胞外泌体的雾化剂的制备方法，其特征在于，S1中，将得到的组织块依次用胰蛋白酶、胶原酶消化的具体步骤为：将组织块置于培养皿中，加入浓度为0.125％的胰蛋白酶，在37℃水浴下消化20-30min，然后离心，弃去上清液，将得到的组织块用PBS洗涤后置于培养皿中，加入浓度为0.2％的胶原酶，在37℃水浴下消化1.5-2h，然后离心，弃去上清液，即可。

5.根据权利要求1所述的含干细胞外泌体的雾化剂的制备方法，其特征在于，S2中，超速离心的转速为100000-150000r/min，时间为30-90min。

6.根据权利要求1所述的含干细胞外泌体的雾化剂的制备方法，其特征在于，S3中，所述复合酶液由胰蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶组成，其中胰蛋白酶的浓度为0.1-0.15％，中性蛋白酶的浓度为0.1-0.2％，碱性蛋白酶的浓度为0.1-0.15％。

7.根据权利要求1所述的含干细胞外泌体的雾化剂的制备方法，其特征在于，S3中，所述酶解反应的条件为：在35-45℃水浴下酶解5-10h。

8.一种如权利要求1或2所述的含干细胞外泌体的雾化剂用于治疗肺部疾病的应用。