[发明专利]一种针对乙型肝炎病毒表面抗原突变株的单克隆抗体

说明书

本申请提供了一种针对乙型肝炎病毒表面抗原突变株的单克隆抗体。从乙肝患者血清中筛选并获得了乙肝病毒新型突变株的HBsAg抗原序列，并将其核苷酸序列导入大肠杆菌表达载体中，制备并获得目标抗原；利用所述HBsAg抗原免疫动物，获得相应单克隆抗体，所述抗体能够高特异性结合目标抗原；利用所述单克隆抗体，制备相关检测试剂盒，该试剂盒具有高度的灵敏性和特异性。

技术领域：

本发明属于疾病诊断和检测领域，具体提供了一种针对乙型肝炎病毒表面抗原突变株的单克隆抗体。

背景技术：

乙型肝炎病毒(hepatitis B，HBV)感染是一个全球公共卫生问题，15-25％的慢性感染者会因肝硬化、肝细胞癌或肝炎而发展为严重疾病并过早死亡。世界卫生组织(TheWorld Health Organization，WHO)估计，在2.4亿慢性HBV感染者中，每年约有780,000人死亡。

目前，没有针对急性乙型肝炎患者的特异性抗病毒治疗药物，大约95％的感染免疫功能正常的成年人会自发恢复，护理的主要目标是保持舒适、缓解症状并防止患者将感染传染给他人。对于慢性HBV感染者，现在已经提供一些治疗药物和治疗方案，如美国食品和药物管理局已批准治疗慢性乙型肝炎干扰素-α(标准和聚乙二醇化)和口服抗病毒药物(恩替卡韦、替诺福韦、富马酸二泊西、艾拉酚替诺福韦和非首选的拉米夫定、阿德福韦二吡呋酯和替比夫定)。目前对慢性乙型肝炎的治疗可以减缓或预防肝硬化的进展，降低肝癌的发病率，提高长期生存率和生活质量，但不能治愈。因此，大多数开始乙肝治疗的患者必须终生服药，治疗的副作用和所需的定期监测增加了患者管理的难度和复杂性。因此，乙型肝炎的防治主要依赖于早期诊断和接种疫苗。

HBV是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科，它于1965年由Blumberg博士发现的，Blumberg博士因此项重大发现而获得了1976年诺贝尔医学奖。HBV病毒，最初称为Dane颗粒，是一种42纳米病毒，HBV由核衣壳核心组成，被外脂蛋白外壳(也称为包膜)包围。该病毒包含3种主要结构抗原：表面抗原(Hepatitis B surface antigen，HBsAg)、核心抗原(Hepatitis B core antigen，HBcAg)和e抗原(Hepatitis B e antigen，HBeAg)，其中HBsAg表达量大，在受感染个体的血液中以球形和管状颗粒(约22nm)的形式存在，使得HBsAg成为乙肝检测试剂和疫苗开发中的重要靶点。

由于乙型肝炎的临床表现与其他病毒性肝炎无法明确区分，因此需要进行血清学检测才能明确诊断，该检测使用不同(组合)血清学标志物来识别HBV感染的不同阶段，单克隆抗体是乙肝病毒检测的重要手段，其能够特异性的结合目标抗原，给出准确的诊断结果。但是随着乙肝疫苗的使用和病毒的自然演进，HBV的突变株层出不穷，使用已知的单克隆抗体难以有效检测患者或血液制品中的HBV含量或感染情况，给临床诊断和血液制品的管理带来了困难。

本发明中乙肝患者血液样品中分离鉴定出新型乙肝病毒突变株，进而获得了其HBsAg氨基酸序列，并以该HBsAg为目标抗原，免疫实验动物，筛选并获得单克隆抗体，该抗体能够高特异性结合目标抗原，具有高灵敏性和特异性，为开发新型乙肝病毒检测试剂提供了新的解决方案。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明中提供了一种抗乙肝病毒表面抗原的单克隆抗体，包含轻链可变区和重链可变区，其轻链可变区包括氨基酸序列为SEQ IDNO:1的LCDR1，氨基酸序列为SEQ ID NO:2的LCDR2，氨基酸序列为SEQ ID NO:3的LCDR3；重链链可变区包括氨基酸序列为SEQ ID NO:4的HCDR1，氨基酸序列为SEQ ID NO:5的HCDR2，氨基酸序列为SEQID NO:6的HCDR3。

本发明所提供的单克隆抗体能够高度特异性结合目标抗原，所述抗原来自新型乙肝病毒突变株，使得该单克隆抗体能够有效检测乙肝病毒突变株，为了研发相关检测试剂，用于检测血液制品的合格性，诊断相关病毒感染状况提供了解决方案。