[发明专利]一种荷花根际促生菌Nn211及其应用

权利要求书

1.一种荷花根际促生菌Nn211，其分类命名为熊齿吉布斯氏菌(Gibbsielladentisursi)，2022年11月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.26047。

2.根据权利要求1所述的荷花根际促生菌Nn211，其特征在于：所述荷花根际促生菌Nn211在LB平板上菌落呈圆形、白色凸起、不透明和粘液状、表面湿润、边缘整齐；Nn211为革兰氏阴性菌，甲基红、V-P、色氨酸脱氨酶、纤维素分解试验均为阴性，接触酶、脲酶试验为阳性，在2～7％NaCl浓度下生长良好；

所述荷花根际促生菌Nn211的16S rDNA核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。

3.含有权利要求1所述的荷花根际促生菌Nn211的菌剂、生物肥料、菌悬液、培养液或发酵产物。

4.权利要求1所述的荷花根际促生菌Nn211或权利要求3所述的菌剂、生物肥料、菌悬液、培养液或发酵产物在如下(1)～(11)中任一种中的应用：

(1)促进植物生长；

(2)制备促进植物生长的产品；

(3)产IAA；

(4)制备产IAA的产品；

(5)产ACC脱氨酶；

(6)制备产ACC脱氨酶的产品；

(7)缓解镉胁迫对植物的伤害并促进镉胁迫下植物的生长；

(8)制备提高植物耐镉能力的产品；

(9)增强植物对镉的吸收积累；

(10)增强植物修复镉污染环境的能力；

(11)制备增强植物修复镉污染环境能力的产品。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述植物为荷花。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

接种Nn211能够促进荷花幼苗及盆栽成年荷花的生长，增加荷花的生物量、叶片数及叶绿素含量、地下芽数等；

镉胁迫下接种Nn211能够缓解镉对盆栽成年荷花的株高、叶片数及叶面积的抑制，显著增加荷花幼苗及成年荷花的生物量及叶片叶绿素含量、降低丙二醛含量，从而增强荷花的耐镉性；

接种Nn211能够促进成年荷花各器官对镉的吸收积累，同时限制镉从地下部向地上部的转移；此外，接种Nn211能够增强荷花对镉的富集能力，显著降低底泥中镉含量，改善底泥环境。

7.权利要求3所述的含有荷花根际促生菌Nn211的菌悬液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：将Nn211菌株接种至LB液体培养基中，30℃，200r/min条件下培养14-18h后，在8000rpm、室温条件下离心10min，用无菌水悬浮清洗两遍，最后再用无菌水重悬，制备成OD₆₀₀＝1.0的菌悬液备用，所述Nn211菌株在所述菌悬液中的浓度为1×10⁸CFU/mL。

8.一种促进荷花幼苗生长的方法，其特征在于：包括如下步骤：

选取饱满圆润的荷花种子，用3％次氯酸钠和75％酒精表面消毒，破壳后置于蒸馏水中催芽2-3d，选取胚轴展出2cm的幼苗移至2L的塑料小盆中，每盆3粒种子，用1L权利要求7所述的菌悬液浸泡幼苗1h，每3d浸泡一次，共3次；30℃、16h光照/8h黑暗、光照强度为18000Lx条件下培养，12d后得到叶片数、叶面积、根长及生物量均有不同程度增加的荷花幼苗。

9.一种提高荷花幼苗耐镉能力的方法，其特征在于：包括如下步骤：

选取饱满圆润的荷花种子，用3％次氯酸钠和75％酒精表面消毒，破壳后置于2L的塑料小盆中，每盆3粒种子，30℃、18000Lx长日照下培养，每5d换一次水；待幼苗长出4-5片叶片，选取长势一致的水培苗，在其根系周围喷施权利要求7所述的菌悬液15mL，每2d喷施一次，共3次，经过处理，能够得到在环境中镉浓度为0-25μmol/L时耐镉能力增强的荷花幼苗。

10.一种促进成年荷花生长及增强荷花修复镉污染环境能力的方法，其特征在于：包括如下步骤：

选取大小一致带顶芽的荷花三年生种藕，将其种植在直径为12.5cm、容积为5L的白色无孔塑料桶中，每盆装土量为2.5kg，每盆种植一支种藕，荷花生长期间进行正常的水肥管理；待荷花长出两片立叶，连续3d在其根际周围注射权利要求7所述的菌悬液150mL，之后每7d注射一次所述菌悬液150mL，共注射6次，经过处理，能够得到在环境中镉浓度为0-30mg/kg时，生物量增加、耐镉性提高且修复镉污染环境能力增强的荷花。