[发明专利]一株中华鳖源按蚊伊丽莎白菌JX2021及应用

说明书

本发明公开了一株中华鳖源按蚊伊丽莎白菌JX2021，按蚊伊丽莎白菌(Elizabethkingia anophelis)JX2021菌株已于2022年04月28日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉)，保藏编号：CCTCC NO:M 2022507。本发明按蚊伊丽莎白菌JX2021对中华鳖具有强致病性，能够引起中华鳖肝、脾、肺、肠道等组织产生不同程度的病变，引起中华鳖“细菌性败血症”，严重可致死；按蚊伊丽莎白菌JX2021还可以用于抗按蚊伊丽莎白菌中华鳖苗种的选育、动物模型构建、药物和疫苗的制备。

技术领域

本发明涉及微生物应用技术领域，尤其涉及一株中华鳖源按蚊伊丽莎白菌JX2021及应用。

背景技术

按蚊伊丽莎白菌(Elizabethkingia anophelis)，黄杆菌科，伊丽莎白菌属，是从致病中华鳖脾脏内分离出的致病菌，主要症状表现为脖子红肿，伸缩困难，精神萎靡，不进食等，判断为“细菌性败血症”。该菌可以在中华鳖养殖生产中广泛传播，且耐药性强，发病时死亡率高。根据按蚊伊丽莎白菌全基因组，对比NFDB毒力因子数据库，预测毒力基因包括16类，246个，其中外毒素相关基因有12个，涉及可促进细菌突破血脑屏障的芳基硫酸酯酶、溶解红细胞的溶血素等相关毒力因子，能够导致肝、脾、肠道组织病变。

近年来，中华鳖养殖规模逐年扩大。在集约化养殖模式下，由于养殖密度增加，养殖水体环境变差等因素导致中华鳖抗病力降低，各种疾病频发且传播速度快。按蚊伊丽莎白菌在中华鳖上的致病研究未见报道，养殖户对该病原菌认识不足，导致生产上乱用药现象严重。因而只有做好该病原菌的分离与鉴定，进行抗生素、中草药等敏感性分析，才能选择合适的药物和合理浓度来防治该病原菌。

尽管目前未见水产动物源按蚊伊丽莎白菌感染人的报道，但是，鳖源按蚊伊丽莎白菌与人源按蚊伊丽莎白菌基因序列相似度较高。现已发现，人源按蚊伊丽莎白菌可引起人类脑膜炎、肺炎、脊髓炎、心内膜炎、皮肤软组织感染、尿路感染、腹腔感染等多种疾病，因此，需要对鳖源按蚊伊丽莎白菌的致病机理、药物敏感性等研究加以重视。

发明内容

1.要解决的技术问题

本发明的目的是为了解决现有技术中按蚊伊丽莎白菌在中华鳖上的致病研究未见报道，养殖户对该病原菌认识不足，导致生产上乱用药现象严重的问题，而提出的一株中华鳖源按蚊伊丽莎白菌JX2021及应用。

2.技术方案

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一株中华鳖源按蚊伊丽莎白菌JX2021，按蚊伊丽莎白菌JX2021菌株已于2022年04月28日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉)，地址：中国武汉，保藏编号：CCTCC NO:M2022507，分类命名为Elizabethkingiaanophelis。

本发明中还提出了一株中华鳖源按蚊伊丽莎白菌JX2021的分离方法，包括以下步骤：

步骤1：培养基的制备：LB液体培养基：蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，溶于1000mL超纯水中，121℃灭菌15min，待冷却至常温后4℃保存备用；LB固体培养基：蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，琼脂粉20g，溶于1000mL超纯水中，121℃灭菌15min，培养液冷却至50℃倒入一次性细菌培养皿，待凝固后4℃保存备用；

步骤2：菌株的分离培养：无菌采集病鳖脾脏，划线接种于LB固体培养基上，28.5℃恒温培养24h，长出单菌落；将长出的单菌落分别接种至LB固体培养基上，30℃恒温培养24h，观察菌落形态是否一致；再次重复以上操作；确定为单菌落后，接种到LB液体培养基中，在摇床中30℃、180rpm条件下培养24h。

本发明中还提出了一株中华鳖源按蚊伊丽莎白菌JX2021在制备引发动物“细菌性败血症”的试剂中的应用。