[发明专利]G6PD敲减肺癌A549稳转细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一种G6PD敲减肺癌A549稳转细胞株及其应用。本发明筛选的G6PD敲减肺癌A549稳转细胞株，其保藏编号为：CCTCCNO:C2021172。另提供一种用Puromycin筛选所述G6PD敲减肺癌A549稳转细胞株的方法，还提供一种用G418筛选所述G6PD敲减肺癌A549稳转细胞株的方法。进一步将所述G6PD敲减肺癌A549稳转细胞株在调控A549细胞戊糖磷酸代谢中和调控A549细胞G6PD表达中应用。本发明的G6PD基因敲减的人肺癌A549‑G6PDΔ稳转细胞株，可作为用于研究G6PD与肺癌肿瘤的相关性及致病机理的试验模型，可用于从G6PD及肿瘤细胞戊糖磷酸代谢角度探索人肺癌发生发展的机制。

技术领域

本发明涉及医学分子生物学技术领域，具体涉及一种G6PD敲减肺癌A549稳转细胞株及其应用。

背景技术

肺癌(lung cancer，LC)是最常见的恶性肿瘤之一，也是全球最致命的癌症，约占所有癌症死亡人数的18.4％。而非小细胞肺癌约占LC的85％，且在诊断时大约75％的患者处于中晚期，五年生存率非常低。临床上肺癌治疗多以手术、化疗和放疗为主，近年来虽已取得显著进展，但是，目前仍然存在生存率低和副作用强等缺陷。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)是戊糖磷酸途径的第一个酶，也是该途径的限速酶，催化来自糖酵解通路中的葡萄糖-6-磷酸，进行氧化脱氢，生成6-磷酸葡萄糖酸-δ-内脂和提供还原氢的NADPH。由于G6PD处在代谢通路中导致核酸合成的关键位置，很早就有假设提出认为G6PD缺陷会干扰正常的细胞功能和复制并会对癌症的发展起保护作用，即G6PD的抑制能够阻止细胞分化和增殖。Board等对一系列细胞系研究发现相比于正常细胞，肿瘤细胞中的G6PD表现出更高活性[Board,M.,S.Humm,and E.A.J.B.J.Newsholme,Maximumactivities of key enzymes of glycolysis,glutaminolysis,pentose phosphatepathway and tricarboxylic acid cycle in normal,neoplastic and suppressedcells.1990.265(2):p.503-509.]。

近年来，在肺癌、黑色素瘤、白血病、结肠癌、子宫内膜癌、乳腺癌、鼻咽癌等许多肿瘤中都发现G6PD高表达。Ryo Nagashio等研究指出G6PD过表达与肺癌患者病理TNM分期显著相关，过表达G6PD阳性患者的生存率明显低于未过表达者，同时多变量分析显示G6PD的表达是一个独立的不良预后因素[Nagashio,R.,et al.,Prognostic significance ofG6PD expression and localization in lung adenocarcinoma.2019.1867(1):p.38-46.]。Li Danyi等通过shRNA逆转录病毒表达靶向沉默了人黑色素瘤A357细胞的内源性G6PD，从而降低了该肿瘤细胞的增殖，诱发凋亡[Li,D.,et al.,A New G6PD KnockdownTumor-Cell Line with Reduced Proliferation and Increased Susceptibility toOxidative Stress.2009.24(1):p.81-90.]。

因此，为了深入探索肺癌的发生机制，寻找肺癌新的治疗靶点，为患者临床治疗奠定坚实的基础，对肺癌细胞进行基因改造是十分必要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种G6PD敲减肺癌A549稳转细胞株及其应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

筛选一种G6PD敲减肺癌A549稳转细胞株，其保藏编号为：。

优选的，其基因组包括干扰RNA的序列；

所述干扰RNA的序列为：AGCGACGACGATGATGGGCT。