[发明专利]用于肺癌早诊及预后评价的检测试剂和试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于肺癌早诊及预后评价的检测试剂和试剂盒，所述检测试剂和试剂盒中包括特异性检测CLDN11基因启动子区域甲基化的试剂，可以在肺癌的一种或多种不同类型样本中检测CLDN11基因启动子区域的甲基化状态，为肺癌的诊断、风险预测、预后判断提供依据，具有灵敏、快速、准确、效率高、成本低等优点。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种用于肺癌早诊及预后评价的检测试剂和试剂盒。

背景技术

目前，肺癌早诊手段包括影像学检查，肺癌细胞学或组织学、痰液细胞学和血清学肿瘤标志物等，但都对预测敏感性及特异性欠佳，不能在多种标本中应用。即使是近年新兴的液体活检技术，就现阶段而言缺乏标准化的检测方法、成本高昂以及临界水平的不确定性等问题，限制了其在常规临床实践中的广泛使用。DNA甲基化是最重要的表观遗传修饰方式，贯穿于肿瘤发生发展的全过程。检测基因在癌症中的甲基化水平，在肺癌的研究中取得较大进展。但目前应用于临床检测的甲基化标志物试剂盒在肺癌中(如Septin 9甲基化检测试剂盒)的敏感性和特异性并不理想。

CLDN11为CLDN家族非经典类型的成员之一，该家族成员包含至少27个跨膜蛋白，是细胞紧密连接和细胞屏障的主要成分。目前CLDN11已被证实在各种实体瘤中被下调，从而减少细胞-细胞粘附导致癌症的转移和进展。也有报道指出在多种癌症中CLDN11启动子区域甲基化可以作为早期诊断的潜在有用生物标志物，如黑色素瘤、膀胱癌、胃癌、结直肠癌和鼻咽癌。但在肺癌中却未见其与甲基化的相关报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于肺癌早诊及预后评价的检测试剂和试剂盒，所述检测试剂和试剂盒中包括特异性检测CLDN11基因启动子区域甲基化的试剂，可以在肺癌的一种或多种不同类型样本中检测CLDN11基因启动子区域的甲基化状态，为肺癌的诊断、风险预测、预后判断提供依据，具有灵敏、快速、准确、效率高、成本低等优点。

本申请发明人利用TCGA在线数据库和实验室收集的配对肺癌和癌旁样本检测结果，进行了CLDN11在肺癌中的表达情况分析，结果表明，CLDN11在肺癌中的表达低于癌旁组织；进一步地，本申请发明人对CLDN11表达与甲基化的相关性进行了分析，结果表明，CLDN11在肺癌中的表达水平与甲基化水平呈负相关；进一步地，本申请发明人对CLDN11在肺癌中的生存曲线进行了分析，结果表明，CLDN11的低表达与肺腺癌患者的不良预后相关。基于此，本申请发明人确定CLDN11可以作为肺癌的生物标志物，用于肺癌的早诊和预后评价。进一步地，本申请发明人分析了CLDN11启动子区域CPG岛，确定了CLDN11高频甲基化区域，高频甲基化启动子区域的转录起始位点为TSS：+1021～+1132。进一步地，本申请发明人针对CLDN11高频启动子甲基化区域设计了特异性引物，并进行了验证，结果表明，特异性引物可以与CLDN11基因DNA甲基化位点序列特异性结合，灵敏、快速、准确地检测CLDN11的甲基化水平。进一步地，本申请发明人还比较了CLDN11与已应用于临床的甲基化标志物Septin9对于癌和非癌的区分能力，结果提示CLDN11的甲基化水平的检测可以更准确和灵敏的区分肿瘤和非肿瘤，有助于肺癌临床诊断。

基于此，本发明公开了如下技术方案：

本发明公开了一种用于肺癌早诊及预后评价的检测试剂，所述检测试剂包括特异性检测CLDN11基因启动子区域甲基化的试剂。

优选的，所述CLDN11基因启动子区域的转录起始位点为TSS：+1021～+1132。

优选的，所述特异性检测CLDN11基因启动子区域甲基化的试剂中包括CLDN11基因启动子区域甲基化的特异性扩增引物，所述引物为：

CLDN11m1:AAATGTTACGTTGATTTTCGTAC，

CLDN11m2:AACCCAACGACGCGAAACG，