[发明专利]一种提高中生菌素发酵效价的生产工艺

权利要求书

1.一种提高中生菌素发酵效价的生产工艺，其特征在于，采用二级发酵工艺，包括如下步骤：

1)配置中生菌素生产种子培养基、发酵培养基和补料培养基，补水定容后，pH自然；

2)种子培养基实消灭菌后，接种成熟的淡紫灰链霉菌斜面或摇瓶种子，按照种子罐的培养条件，培养周期内取样及镜检，监测菌丝镜检形态和密度、pH、菌浓等各项理化指标，待种子指标合格，按比例移入发酵罐；

3)按照发酵的培养条件，按照工艺要求控制pH和溶氧在设定范围内有规律波动，在发酵进入对数期，根据工艺要求选择具体补料时间，及时补料，控制菌浓相对稳定，发酵后期，取样监测发酵产物F组分和B组分的产量曲线拐点，或根据溶氧条件控制拐点和pH拐点，选择合适时间下罐。

2.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，步骤1)中，种子培养基的各物质比例，基本配方如下。

以上物料混和后灭菌，消毒后控制pH在6.6-6.8；

发酵培养基的各物质比例，基本配方如下：

以上物料除葡萄糖外，采用混和后灭菌方式，葡萄糖以50-55％质量分数的液糖单独消毒后，移种前补入，总糖控制在在4.0-4.5％，还原糖在2.4-2.8％之间，发酵0h总氮控制在190-220mg/L之间；

补料培养基的各物质比例，基本配方如下：

以上物料除葡萄糖外，采用混和后灭菌方式，葡萄糖以50-55％质量分数的液糖单独消毒后，补料前补入。

3.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，步骤2)中，种子罐的培养条件：温度30.0-32.0℃，压力0.03MPa，溶氧低于55％提条件，风量系数0.8-1.5，转速300-500rmp，培养周期24-36h。

4.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，步骤2)中，种子合格指标：pH回升至峰值出现下降拐点后0-4h，取样镜检：菌丝粗壮色深、大网状、菌团内部致密，4000rmp离心5-10min，体积法菌浓增长达到6-10％之间，控制移种比例在1.5-2.0％之间。

5.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，步骤3)中，发酵的培养条件：风量系数0.95-1.45，温度26.0-32.0℃，压力0.015-0.03MPa，溶氧35-55％，转速300-450rpm，pH6.0-7.2。

6.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，步骤3)中，首次补料时间以溶氧和pH拐点为准，溶氧65％-75％之间，pH低于初始值0.3-0.4个点，镜检菌丝呈小网、密度明显增加，及时补料，补料体积25-30％。

7.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，步骤3)中，二次补料时间以转速和菌浓指标为准，转速提至400-450rpm，体积法菌浓增长量达到8-10％，及时补料，补料体积10-15％。

8.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，步骤3)中，发酵过程pH在6.0-6.8之间，如出现pH低于6.0情况或趋势，36h后通过补水10-15％体积，或放料10％降低罐容，或两种方案同时使用控制，提高罐内溶氧至55％左右，或溶氧不再下降，控制pH下降趋势减缓或平稳。

9.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，步骤3)中，发酵后期，当pH和溶解氧(DO)都出现持续回升，每4h取样测定B组分的含量(HPLC法)，当溶氧快速回升，转速降至300-350rpm，或B组分峰面积折算含量800-1300U时，准备放罐，发酵时间控制在60-72h之间，保证总糖及还原糖分别降至0.6-1.5％、0.2-0.5％，碳源利用率在75％-85％。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的生产工艺得到的中生菌素高质量发酵物料，其特征在于，所述的发酵物料的最高菌浓在18-22％之间，总糖及还原糖分别降至0.6-1.5％、0.2-0.5％，生产效价达到15000U左右，碳源利用率在70％-85％。