[发明专利]一种稳定敲除METTL7B基因的脑胶质瘤重组细胞及其构建方法

权利要求书

1.重组细胞，其特征在于：所述重组细胞不含有METTL7B蛋白的编码基因或所述METTL7B蛋白的表达量降低或所述METTL7B蛋白的活性降低，所述METTL7B蛋白为下述任一种：

A1)、氨基酸序列是SEQ ID No.1的蛋白质；

A2)、A1)所示的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有80％以上的同一性且与METTL7B蛋白相关的蛋白质；

A3)、在A1)或A2)的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质。

2.根据权利要求1所述的重组细胞，其特征在于：所述重组细胞按照权利要求3-7中任一所述的方法构建。

3.构建权利要求1所述的重组细胞的方法，其特征在于：所述方法包括将受体细胞中的METTL7B基因敲除获得所述重组细胞，所述METTL7B基因为下述任一种：

g1)、编码链的编码序列是SEQ ID No.2所示的DNA分子；

g2)、编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.3所示的DNA分子；

g3)、与g1)或g2)限定的核苷酸序列具有80％或80％以上同一性，且编码权利要求1中所述METTL7B蛋白的DNA分子。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述将受体细胞中的METTL7B基因敲除包括：使所述受体细胞感染慢病毒，所述慢病毒表达靶向所述METTL7B基因的gRNA和Cas9蛋白。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述gRNA的靶标序列为SEQ IDNo.4。

6.根据权利要求3-5中任一项所述的方法，其特征在于：所述将受体细胞中的METTL7B基因敲除为将所述受体细胞中的所述METTL7B基因进行如下突变：在SEQ ID No.3第293位和294位核苷酸之间插入了1个核苷酸T。

7.根据权利要求3-6中任一项所述的方法，其特征在于：所述受体细胞为下述任一项：

C1)、动物细胞；

C2)、哺乳动物细胞；

C3)、人细胞；

C4)、人胶质瘤细胞；

C5)、U251细胞。

8.与权利要求1所述重组细胞相关的生物材料，所述生物材料选自下述任一种：

B1)、抑制或降低权利要求书1中所述METTL7B蛋白的编码基因的表达或权利要求1中所述METTL7B蛋白的活性的核酸分子；

B2)、含有B1)所述核酸分子的表达盒；

B3)、含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；

B4)、含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物。

9.根据权利要求8所述的生物材料，其特征在于：B1)所述核酸分子为靶向权利要求1所述重组细胞中的所述METTL7B基因的gRNA或所述核酸分子为表达靶向权利要求1所述重组细胞中的所述METTL7B基因的gRNA的DNA分子。

10.根据权利要求9所述的生物材料，其特征在于：所述gRNA的靶标序列为SEQ IDNo.4。