[发明专利]一种作为生物标志物的微小RNA及在皮肤光老化中的应用

说明书

本发明提供一种作为生物标志物的微小RNA及在皮肤光老化中的应用。通过收集供体太阳光紫外线照射的和免受太阳光紫外线照射的皮肤样本，分离单个黑色素细胞，检测miR‑656‑3p的表达并用抑制剂敲低，检测miR‑656‑3p inhibitor对光老化动物模型的治疗作用，揭示了miR‑656‑3p的表达与黑色素细胞衰老及皮肤光老化的发生发展密切相关，生物信息学分析表明LMNB2是miR‑656‑3p的一个靶基因，miR‑656‑3p通过靶向黑色素细胞内LMNB2调控皮肤光老化的发生发展。本发明为诊断皮肤光老化提供了新的潜在标识物；也为皮肤光老化的防治提供了新的靶点。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种作为生物标志物的微小RNA及在皮肤光老化中的应用。

背景技术

光老化(photoaging)是紫外线长期照射引起的皮肤老化，是衰老的外在表现，其不仅产生皱纹、松弛、色斑、暗沉等各种损美性外观变化，而且降低皮肤屏障功能，甚至可诱发皮肤癌等皮肤病变。皮肤老化反映在细胞水平即为细胞衰老，新近研究表明黑色素细胞是唯一表达衰老标记物p16^INK4a的表皮层细胞，它会影响周围细胞功能，从而启动皮肤老化进程。由于对细胞衰老的机制尚不完全清楚，目前几乎没有真正有效的干预措施。与此同时，皮肤光老化的诊断目前仅靠外观表现及部分量表，缺乏分子层面的诊断标识物。因此，寻找皮肤光老化的新型标识物和潜在干预靶标是目前较为迫切的需求。

微小RNA(microRNA)，是一类非编码单链小分子RNA，长度约为22nt(核苷酸)，以互补形式识别并结合靶基因的mRNA，通过裂解或抑制其翻译过程调节基因在转录后水平的表达。

微小RNA的命名是以其被发现的时间顺序为依据的，以hsa-miR-29b-1-5p为例：hsa表示的是该分子所属的物种是人类，miR是成熟体微小RNA的标识，29则是该microRNA所属家族成员被发现时按照顺序被给予的一个流水号，“b”、“-1”、“-5p”则分别指代产生该成熟体微小RNA的前提序列、基因组位置、前体5’端臂的编号。

已有研究表明，微小RNA在皮肤衰老中扮演了重要角色。而miR-656-3p在皮肤光老化中的功能尚不明确。这项研究旨在探索miR-656-3p可通过调节黑色素细胞衰老影响皮肤光老化的发生与发展。

发明内容

本发明的目的是提供一种作为生物标志物的微小RNA，所述微小RNA是miR-656-3p。

所述的miR-656-3p的序列如SEQ ID NO.1所示：

Hsa-miR-656-3p:tctccaactgacatattataa。

本发明所述的miR-656-3p，可以来自人体组织标本及被分离细胞，或可通过人工合成的方式获得。

本发明的另一个目的是提供所述微小RNA作为生物标志物在制备诊断皮肤光老化试剂中的应用。所述皮肤光老化包括黑色素细胞衰老。

本发明的再一个目的是提供所述微小RNA作为生物标志物在制备防治皮肤光老化药物中的应用。

本发明提供的miR-656-3p通过以下技术手段筛选获得：

采集太阳光紫外线(UV)照射的和免受太阳光紫外线照射的正常人体皮肤样本，采用高通量测序检测微小RNA表达谱。比较不同照射条件下皮肤微小RNA表达谱的差异，筛选归纳后得到在UV照射组皮肤中表达水平显著升高的皮肤光老化微小RNA标志物miR-656-3p。

经RT-PCR实验检验，60mJ/cm²辐照强度的UVB促进人表皮黑色素细胞衰老，同时所述标志物miR-656-3p在细胞内含量显著上调。应用miR-656-3p inhibitor敲低黑色素细胞内miR-656-3p含量后，细胞周期阻滞及β-半乳糖苷酶阳性率显著缓解