[发明专利]一种内寄生蜂的基因沉默方法

权利要求书

1.一种对内寄生蜂进行基因沉默的方法，其包括如下步骤：

（1）制备点滴液：根据靶标基因的序列设计和合成dsRNA，使用纳米材料溶液对靶标基因的dsRNA进行稀释至终浓度得到dsRNA混合液；

（2）挑选蜂蛹：先体式显微镜下检查内寄生蜂的蛹，挑选生理状态一致的丽蚜小蜂蛹；

（3）制备针管：将毛细玻璃针管的针头制成10-20度的倾斜角；

（4）吸取点滴液：向毛细玻璃针管内注入dsRNA混合液；

（5）针头破蛹：采用毛细玻璃针管的针头将即将羽化的丽蚜小蜂适龄蛹壳挑破；

（6）点滴蜂蛹：注射仪从用毛细玻璃针头挑破的蛹壳小孔处滴入dsRNA混合液；

（7）恒温培养：将内寄生蜂蛹放入培养箱中进行培养至羽化。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第（2）中将干瘪的、空壳的、畸形的、未被寄生的等非正常蛹壳以及背部朝下和体姿不正常的蛹壳，使用解剖针小心去除。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第（3）中毛细玻璃管采用 P-97micropipette拉针仪进行拉制获得，并使用EG-401 microgrinder磨针器进行针头处理，使其针头有1-16度的倾斜角。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第（4）中采用10 ml艾本德Microloader枪头吸取dsRNA混合液，再慢慢注入拉制好的玻璃针管内。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第（5）中挑破位置为蛹壳背面中下部位的表皮，注意不能刺破壳内虫体。

6.如权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于，所述内寄峰为丽蚜小蜂。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，第（6）中注入的dsRNA混合液的量以液滴不淹没内寄峰虫体为宜，具体地单头蛹点滴体积约为50 nL。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，第（7）中是将内寄生蜂蛹放入温度26 ±1℃、湿度为60± 5%、光照周期16 h: 8 h（L: D）的人工气候培养箱中进行培养至羽化。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，进一步通过逆转PCR检测基因的表达量来判断基因沉默是否成功。