[发明专利]一种酵母中过量供应胞质乙酰辅酶A的方法及其应用

权利要求书

1.一种过量供应胞质乙酰辅酶A的重组基因工程菌的构建方法，其特征在于，将出发菌酵母内源乙酰辅酶A羧化酶ACC1突变为ACC1^S667D、ACC1^S667E、ACC1^S1178D和ACC1^S1178E，构建出含有相应的ACC1突变体的突变重组基因工程菌；优选地，所述酵母是具有内源性乙酰辅酶A羧化酶ACC1的解脂耶氏酵母、酿酒酵母、克鲁维酵母、巴斯德毕赤酵母、汉逊酵母等酵母中的任一种。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述出发菌酵母是解脂耶氏酵母GA-1。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述出发菌酵母还进行如下至少一种改造：所述出发菌酵母中肉碱乙酰转移酶CAT2基因、三酰基甘油脂肪酶TGL4基因、脂肪酸辅酶A合成酶FAA1基因、多功能β氧化酶MFE1基因、3-酮酰基辅酶A巯基酶POT1基因、过氧化物酶体基质蛋白PEX10基因柠檬酸裂解酶ACL1基因和柠檬酸裂解酶ACL2基因、表达强化以增加所表达蛋白的含量和/或活性；优选地，其通过增加所述出发菌酵母中相应酶基因的拷贝数或转录水平实现。

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述ACC1基因编码的ACC1蛋白质的序列为Genbank登陆号AOW02694.1；和/或，所述CAT2基因编码的CAT2蛋白质的序列为Genbank登陆号AOW01502.1; 和/或，所述TGL4基因编码的TGL4蛋白质的序列为Genbank登陆号AOW06932.1；和/或，所述FAA1基因编码的FAA1蛋白质的序列为Genbank登陆号AOW04223.1；和/或，所述MFE1基因编码的MFE1蛋白质的序列为Genbank登陆号AOW05454.1；和/或，所述POT1基因编码的POT1蛋白质的序列为Genbank登陆号AOW05614.1；和/或，所述PEX10基因编码的PEX10蛋白质的序列为Genbank登陆号AOW02173.1；和/或，所述ACL1基因编码的ACL1蛋白质的序列为Genbank登陆号AOW06401.1；和/或，所述ACL2基因编码的ACL2蛋白质的序列为Genbank登陆号AOW04580.1。

5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，通过向所述出发菌导入相应基因表达盒实现。

6.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，，所述基因表达盒包括启动子、所述基因开放阅读框和终止子，所述启动子为P_EXP1；所述终止子为T_PEX20。

7.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述出发菌酵母中ACC1基因的突变通过定点突变实现；进一步优选地，所述突变是使ACC1蛋白的氨基酸序列第667位丝氨酸和1178位丝氨酸均被突变为天冬氨酸或谷氨酸。

8.如权利要求1至7任一项所述的构建方法，其特征在于，基因工程改造所涉及基因均为来源于解脂耶氏酵母的基因。

9.如权利要求1至7任一项所述的构建方法获得的重组基因工程菌。

10.一种在生产倍半萜产品相关的应用，其选自下述应用之一：权利要求1至7任一项所述的构建方法或其得到重组基因工程菌在制备生产倍半萜的产品中的应用；权利要求1至7任一项所述的构建方法或其得到重组基因工程菌在生产倍半萜中的应用。