[发明专利]结合IGFBP-2蛋白的核酸适体及其应用

说明书

本发明公开了结合IGFBP‑2蛋白的核酸适体及其应用，属于生物技术领域。本发明核酸适配体通过活体筛选得到，序列如SEQ ID NO.1所示。本发明核酸适配体具有高度特异性、化学性质稳定、易于制备保存、分子量小、亲和力高、稳定性强等特点；并且，相比于体外筛选，活体筛选所得的核酸适配体稳定性更佳，更适于结合体内的特异性靶标。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及结合IGFBP-2蛋白的核酸适体及其应用。

背景技术

IGFBP2（insulin-like growth factor binding protein 2）是IGFBP家族六个同源蛋白之一，由289个氨基酸构成，蛋白分子质量为36kDa，存在保守的氨基端和羧基端，以及中间的不保守连接区；与IGF有高亲和力，可以通过与IGF结合来调控细胞的生物学活性；在此前的研究中发现，IGFBP2也是肿瘤区域最丰富以及常见的蛋白之一，在肿瘤的转移、侵袭、增殖、血管生成、上皮间质转换以及免疫调控等方面都起着至关重要的作用，这主要由于IGFBP2作为分泌蛋白，其结构包含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列（RGD）序列、肝素结合域（HBD）以及核定位序列（NLS）；例如，其中RGD序列可以同整合素结合来调控下游细胞信号通路，从而提高肿瘤的侵袭和迁移能力，而HBD序列可以与细胞外基质中的糖胺聚糖结合，来调控肿瘤细胞的生长、分化、迁移等；此外，IGFBP2在脑胶质瘤、卵巢癌、乳腺癌以及前列腺癌中过度表达，因此也可以作为肿瘤诊断以及预后检查的一类生物标志物。

核酸适配体是指从人工合成的单链DNA/RNA文库中筛选得到的能够高特异性地和高亲和力地与靶标分子结合的单链寡核苷酸。核酸适配体借助氢键、范德华力、疏水作用等分子间作用力形成特殊的三维结构，如发夹、凸环、G-四聚体等，从而特异地识别靶物质甚至影响其生物活性。核酸适配体本身特有的生化特性使其在生物医学应用领域具有诸多优势，如高度特异性、化学性质稳定、易于制备保存、分子量小等。

通过指数富集系统进化配体（SELEX）和细胞-SELEX是目前核酸适配体筛选的主要方法，经过几轮筛选后，与靶标结合的序列会得到富集，随后将富集的序列进行测序、鉴定，得到特异性的核酸适配体；但由于分子间相互作用、微环境等的不同，在体外筛选得到的核酸适配体与靶标结合构象通常与体内不同，这也使得核酸适配体无法在体内发挥很好的作用。更好的筛选方法有待进一步研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够结合IGFBP-2蛋白的核酸适配体，该种核酸适配体具有高度特异性、化学性质稳定、易于制备保存、分子量小、亲和力高、稳定性强等特点。并且本发明核酸适配体是采用活体筛选所得，通过该方法得到的核酸适配体的稳定性较体外筛选所得的适配体的体内稳定性有所提升。

为达到上述发明目的，采用如下技术方案。

一种结合IGFBP-2蛋白的核酸适配体，核酸适配体序列包括如SEQ ID NO.1所示序列；

SEQ ID NO.1：

TGCTGGATGTTCCACACTGCCACTCATTTGCCTCTCTCACCACGACTGACACATCCAGC。

优选地，上述核酸适配体通过活体SELEX筛选得到。

优选地，上述核酸适配体的筛选文库为：

5’-GTTCGTGGTGTGCTGGATGT（N36）TGACACATCCAGCAGCACGA-3’（SEQ ID NO.2）。

优选地，上述核酸适配体的制备方法包括：

文库和引物的设计与合成；

核酸适配体筛选；

核酸适配体鉴定。

更优选地，核酸适配体筛选包括：

荷瘤小鼠模型构建；

向小鼠模型体内注入文库；

收集、扩增和纯化肿瘤组织细胞中核酸分子；