[发明专利]一种新型睾丸线粒体标记物检测试剂盒的制备方法

说明书

本发明公开了一种新型睾丸线粒体标记物检测试剂盒的制备方法，所述的试剂盒以在睾丸组织中优势表达CG8728蛋白作为睾丸线粒体特异性检测方法。试剂盒通过检测果蝇睾丸组织中CG8728蛋白的第312‑326位氨基酸(C‑DSGPKQVDTSIAQYT)的表达水平进行睾丸线粒体表达模式的检测。CG8728蛋白在睾丸组织各级生精细胞的线粒体中均有表达。本发明通过检测睾丸组织中CG8728蛋白的表达模式可以有效判断睾丸组织中各级生精细胞的线粒体分布情况。CG8728蛋白作为一种新型睾丸优势表达蛋白，利用其制备的试剂盒可有效应用于睾丸组织线粒体表达分布的检测，对睾丸线粒体研究具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及CG8728蛋白在制备睾丸线粒体标记物检测试剂盒中的制备方法，属于男科学领域。

背景技术

在果蝇的睾丸中，线粒体是重要的细胞器，在精子发生过程中其大小和形状会发生动态变化。线粒体定位于精原细胞和精母细胞的细胞质中，并进一步迁移、聚集、融合，在早期圆形精母细胞的细胞核附近形成Nebenkern结构。精子包含两个线粒体衍生物(即主要线粒体衍生物和次要线粒体衍生物)，沿精子尾部伸长，与轴丝密切相关。主要线粒体衍生物积累副晶体，而次要线粒体衍生物体积逐渐减小。最近的一项研究表明，精子亮氨酸氨基肽酶(S-LAP)家族包含八个密切相关的亚基，均在睾丸组织中特异性表达，并被确定为主要线粒体衍生物中副晶体物质的关键成分。Bb8在减数分裂后的精子中高度表达，并定位于线粒体。研究发现，Bb8突变体睾丸出现了巨型线粒体，且副晶体物质在两种精子线粒体衍生物中分布异常。此外，有研究表明，knon是Nebenkern和长形精子线粒体内部结构所需的。一项研究证明线粒体-微管连接蛋白Milton在线粒体中高度富集，是微管运动所必需的，提示线粒体可以对微管介导的长形精子个体化复合体发挥作用。

睾丸优势表达基因CG8728的编码蛋白在N端和C端分别包含了一个肽酶M16结构域，其序列在人和果蝇等多个物种中均为高度保守。通过分析果蝇睾丸单细胞测序数据发现，CG8728基因在果蝇睾丸干细胞微环境的各类细胞中均有较高表达。基于肽酶M16结构域推测，CG8728蛋白可以通过线粒体转运蛋白调控线粒体的功能。已有研究报道，PMPCA基因(CG8728的人同源基因)的多个突变位点可能与多种严重的线粒体疾病相关，包括小脑共济失调、发育迟缓等。

研究表明，CG8728蛋白可以与RNA结合蛋白Orb2相互作用，形成CG8728/Orb2复合体，从而影响下游靶标的表达。orb2也是睾丸优势表达基因，其编码蛋白包含了两个功能保守的结构域，即RNA recognition motif(RRM)结构域和Cytoplasmic polyadenylationelement-binding protein,ZZ(CEBP_ZZ)结构域。Orb2作为胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白，可以通过核糖体结合下游靶标的mRNA来抑制或激活蛋白翻译过程。已有报道显示，Orb2蛋白在果蝇睾丸生殖细胞和体细胞中广泛表达，且在精子发生的多个阶段均发挥了关键作用，最终导致了雄性生育障碍。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型睾丸线粒体标记物检测试剂盒的制备方法。CG8728蛋白是本课题组前期研究鉴定到的关键蛋白之一，可以通过睾丸线粒体参与调控精子发生过程，因此具有重要的研究意义和应用价值。通过检测CG8728蛋白的表达模式可以有效判断睾丸线粒体的表达分布情况。本发明为解决上述技术问题采用以下技术方案：

CG8728蛋白在制备一种新型睾丸线粒体标记物检测试剂盒中的应用，所述的试剂盒以在睾丸组织中检测CG8728的表达模式作为新型睾丸线粒体的标志物。

进一步的，所述试剂盒利用CG8728蛋白的抗体来检测睾丸样本中CG8728蛋白第312-326位氨基酸的表达模式。

进一步的，睾丸组织中CG8728蛋白第312-326位氨基酸的表达模式与睾丸线粒体标记物的表达模式一致。

进一步的，所述样本组织为果蝇睾丸组织。