[发明专利]NKT细胞、其衍生细胞及在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明公开了一种NKT细胞、其衍生细胞及在制备抗肿瘤药物中的应用，所述NKT细胞命名为ABL‑01，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2023年1月11日，保藏编号为C202314。本发明ABL‑01细胞不会引起排异反应，适合回输给不同的癌症患者，不仅对癌细胞株具有杀伤力，对原代肺癌细胞和原代卵巢癌细胞也具有很强的裂解效果，同时还可以识别和裂解其他多种癌细胞。本发明还对ABL‑01进行加工和升级，参照嵌合抗原受体（CAR）的原理构建了CAR‑UNKT，将靶向间皮素的单链抗体基因整合到ABL‑01的染色体中，构建后的CAR‑UNKT就能精准地识别和杀伤卵巢癌细胞，而不攻击正常细胞。

技术领域

本发明属于NKT细胞技术领域，具体涉及一种NKT细胞、其衍生细胞及在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

癌症防治形势十分严峻，中国在0-64岁国民中，每死亡4人，即有1人死于癌症。目前，中国每年用于癌症患者的治疗费用高达1000亿元，患者人均支出约7万元、晚期癌症的治疗基本要花掉患者家庭的全部积蓄。

以细胞治疗为主的精准医疗已经得到了高度关注。肿瘤治疗的常规手段主要有手术、放疗和化疗。这些治疗措施都具有巨大的副作用，而免疫治疗则相对安全，因此越来越受到重视。免疫治疗通过提升患者免疫系统的功能，利用免疫细胞去清除体内的癌细胞，从而达到治愈癌症的效果。免疫治疗主要又分抗体治疗和细胞治疗两种。目前最流行的PD-1抗体治疗，通过阻断对CD8+T细胞的抑制来加强CD8+T细胞对癌细胞的杀伤功能。细胞免疫治疗则是一种过继性治疗，该技术首先对患者自身T细胞在体外进行基因工程加工和扩增，然后再注射回患者体内。这种加工后的T细胞称为嵌合抗原受体修饰的T细胞，或简称CAR-T（chimeric antigen receptor-modified T cells）。CAR-T在治疗白血病，多发性骨髓瘤等血液肿瘤方面已经获得成功。并且国内已有两款CAR-T细胞治疗药物获得CFDA批准。

虽然CAR-T对血液肿瘤效果显著，但是CAR-T对实体瘤疗效甚微。嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）治疗是抗肿瘤免疫治疗最热门的领域之一，也是近十年来免疫医学的重大突破。作为CAR-T细胞的核心结构，CAR是一种基因工程加工的融合蛋白，可以在细胞表面表达并能特异性识别肿瘤抗原。它主要由细胞外单链抗体可变区（scFv）、铰链区、跨膜区和细胞内结构域组成。细胞外scFv结构一般由肿瘤抗原对应的抗体修饰而来。原则上，CAR-T细胞识别抗原的方式不同于天然TCR结构，不依赖于MHC抗原呈递，有利于克服MHC表达下调引起的免疫逃逸，进一步拓展T细胞治疗的应用。目前，靶向CD19的CAR-T细胞治疗在血液肿瘤治疗方面取得了显著进展。在全球范围内，已有八种CAR-T产品获得批准，主要针对CD19和BCMA。在实体瘤方面，针对不同类型肿瘤的靶点已经开发出来，CAR-T细胞疗法陆续进入临床试验。然而，大多数临床试验并未达到预期效果，主要障碍是肿瘤抗原的异质性、免疫逃逸和免疫抑制肿瘤微环境。尽管目前该领域的进展已被证明相当缓慢，但随着更多靶点的发现和未来临床试验的优化，实体瘤有望成为CAR-T的主要治疗领域。

间皮素（MSLN）是一种细胞表面糖蛋白，在大多数恶性胸膜间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌和直肠癌中过表达，而正常组织表达很少。由于MSLN在正常组织和肿瘤组织之间差异表达，MSLN是肿瘤治疗的潜在靶点之一。在临床前研究中，Carl June的研究小组观察到CAR-T通过靶向MSLN具有更大的抗肿瘤作用。随后，他们使用mRNA转染的CAR-T评估了MSLN作为靶标在临床实践中的疗效，并报道了CAR-T在乳腺癌患者中的安全性和有效性。另一项I期临床试验评估了靶向MSLN的CAR-T治疗转移性胰腺导管腺癌的疗效。静脉滴注CAR-T后，临床结果显示2例患者都出现对症反应，无进展生存期分别为3.8个月或5.4个月。并且治疗同样具有良好的安全性。目前，已经对卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌等多种实体瘤的治疗进行了多项临床研究，多项数据表明了该疗法的可行性和安全性。