[发明专利]一种基于磁珠法提取DNA的裂解液、试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种基于磁珠法提取DNA的裂解液、试剂盒及提取方法，其所述裂解液，包括氯化钠、Tween‑20、乙二胺四乙酸、异硫氰酸胍；所述裂解液中氯化钠浓度为2‑3mol/L，Tween‑20的体积分数为10％‑20％，这种含有高浓度的氯化钠和Tween‑20的裂解液可以取代蛋白酶K的作用，无需额外添加蛋白酶K即可使核酸与组蛋白分离，游离出DNA。采用本发明提供的磁珠法提取DNA，在提取血液基因组DNA时无需添加蛋白酶K和加热，能够在常温条件下提取高纯度的DNA，检测结果更准确。利用本发明提供的裂解液制备的DNA提取试剂盒，能够常温提取血液基因组完整的DNA，市场应用前景广阔。

技术领域

本发明属于生物技术应用领域，更具体地，涉及一种基于磁珠法提取DNA的裂解液、试剂盒及提取方法。

背景技术

从血液中分离基因组DNA是临床诊断和基因组研究的基础,血液中的众多指标检测对于很多疾病的早期诊断、预后判断、复发监测及疗效评估都有重要的临床意义。目前血液基因组DNA的提取主要分为两大类：第一类为白细胞基因组DNA提取，该方法需要先进行白细胞的分离后进行提取，操作复杂，不容易实现自动化；第二类为直接使用全血进行血液基因组DNA的提取，主要包括离心柱法提取、有机溶剂提取方法以及磁珠法提取。

其中离心柱法提取需要多次离心，操作时间久，同时由于离心剪切力的作用会破坏提取核酸的完整性，导致检测准确性较差；有机溶剂提取中常用的如苯酚氯仿提取法，需要使用到有毒的有机溶剂，对操作人员的身体健康有一定的影响，且提取的DNA纯度不高；虽现有磁珠法提取DNA，无毒无危害，操作简单，但磁珠法提取中需配合使用裂解液和蛋白溶解酶如蛋白酶K，而且需要加热配合生物酶进行提取，提取过程中容易造成气溶胶的污染，以及高温造成DNA结构的破坏导致提取的DNA完整性较差。因此，研究一种常温提取完整DNA且安全有效的提取方法，对于实现高通量提取和降低感染风险有重大意义，利于提高血液检测工作效率和准确性。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种基于磁珠法提取DNA的裂解液、试剂盒及提取方法，其目的在于发现在提取DNA过程中采用含2-3mol/L氯化钠和体积分数为10％-20％Tween-20的裂解液裂解细胞时，无需添加蛋白酶K且可常温裂解，由此解决现有磁珠法提取DNA时需添加蛋白酶K并需加热提取，由于高温破坏DNA的结构导致提取的DNA完整性较差，检测不够准确的技术问题。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种基于磁珠法提取DNA的裂解液，其所述裂解液，包括氯化钠、Tween-20、乙二胺四乙酸、异硫氰酸胍；所述裂解液中氯化钠浓度为2-3mol/L，Tween-20的体积分数为10％-20％。

优选地，所述基于磁珠法提取DNA的裂解液，其所述裂解液中氯化钠浓度为2mol/L，Tween-20的体积分数为10％。

优选地，所述基于磁珠法提取DNA的裂解液，其所述裂解液中异硫氰酸胍为3.5-5mol/L。

优选地，所述基于磁珠法提取DNA的裂解液，其所述裂解液中乙二胺四乙酸的浓度为10-100mmol/L。

按照本发明的另一方面，还提供了一种如本发明所述基于磁珠法提取DNA的裂解液在提取DNA中的应用。

优选地，所述的应用，其所述裂解液在裂解细胞时，不使用蛋白溶解酶且在常温条件下裂解细胞，所述蛋白溶解酶，包括蛋白酶K。

按照本发明的另一方面，还提供了一种磁珠常温提取DNA的方法，其包括以下步骤：

取预设量的血液样本，按照预设体积比加入如本发明所述的基于磁珠法提取DNA的裂解液混合，常温裂解，获取上清液；

向获得的上清液中加入结合液、磁珠、洗涤液、洗脱液，收集提取产物DNA。