[发明专利]基于KFERQ序列的蓝光控制蛋白降解系统及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种基于KFERQ序列的蓝光控制蛋白降解系统，其特征在于，所述蓝光控制蛋白降解系统包括蓝光控制单元和靶向单元；所述蓝光控制单元由KFERQ序列和LOV2序列重组而成；所述靶向单元为蛋白靶向序列。

2.根据权利要求1所述的基于KFERQ序列的蓝光控制蛋白降解系统，其特征在于，所述蓝光控制单元为KFERQ-LOV2(KL)重组序列。

3.根据权利要求1所述的基于KFERQ序列的蓝光控制蛋白降解系统，其特征在于，所述LOV2序列为eLOV2或cpLOV2序列；所述蛋白靶向序列是内源性蛋白序列，为细胞内过表达的EGFP序列、内源性AKT序列、内源性pAKT序列中的任一种。

4.权利要求1-3任一项所述的基于KFERQ序列的蓝光控制蛋白降解系统的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)LOV2序列的获得：以已被验证有效的eLOV2或cpLOV2为LOV2序列；

(2)重组质粒的构建：以FV185为质粒载体，先将eLOV2或cpLOV2序列与KEFRQ序列进行重组，得到KL或LOV2-KFERQ(LK)重组序列，然后在N端或C端插入蛋白靶向序列，即得重组质粒。

5.根据权利要求4所述的基于KFERQ序列的蓝光控制蛋白降解系统的构建方法，其特征在于，所述重组质粒包括蛋白靶向序列-LK或KL-蛋白靶向序列。

6.根据权利要求4所述的基于KFERQ序列的蓝光控制蛋白降解系统的构建方法，其特征在于，所述重组质粒包括KL-蛋白靶向序列。

7.一种由权利要求1-3任一项所述的蓝光控制蛋白降解系统在降解外源性过表达的EGFP、降解内源性促癌蛋白中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，应用于降解外源性过表达的EGFP时，将含蛋白靶向序列为EGFP的蓝光控制蛋白降解系统的质粒转染受体细胞6-18h后，在光照条件下培养24h，检测EGFP降解情况。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，应用于降解内源性促癌蛋白时，将蛋白靶向序列为2xAKTin的蓝光控制蛋白降解系统的质粒转染受体细胞6-18h后，在光照条件下培养24h，检测AKT、pAKT降解情况。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述光照条件为：蓝光，波长为470nm，功率为4mW/cm²。