[发明专利]一种可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法

权利要求书

1.一种可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一 病毒的处理

将鸭坦布苏病毒用生理盐水1000倍稀释后于无菌分装瓶内得到初代病毒，抽取0.1ml初代病毒接种于生长状况良好的10日龄鸭胚，将接种好的鸭胚置于36～38℃培养箱培养，将48～96h死亡的鸭胚取出，置于5～8℃的冷藏箱中静置16～20h后收集尿囊液，得到病毒原液；

步骤二 疫苗的制备

取病毒原液，进行离心，向上清液中加入疫苗灭活剂，灭活24～30h，得到鸭坦布苏病毒疫苗；

步骤三 疫苗的接种

取100～120日龄蛋鸡20～30只，在每只蛋鸡的颈部接种1～1.5mL鸭坦布苏病毒疫苗，完成第一次免疫，12～16天后在每只蛋鸡的腿部接种2～2.2mL鸭坦布苏病毒疫苗，进行第二次免疫，25～28天后在每只蛋鸡的胸部接种2.2～2.4mL鸭坦布苏病毒疫苗，进行第三次免疫，并取得免疫鸡蛋；

步骤四 抗体的提取

将免疫鸡蛋消毒后打碎，分离出免疫卵黄，将免疫卵黄用无菌水稀释，搅拌均匀，控制温度为2～6℃静置16～20h后进行离心，分离出水相，将所述水相纯化后，过滤除菌后得到鸭坦布苏病毒抗体。

2.根据权利要求1所述的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，其特征在于，所述纯化包括如下步骤：

在所述水相中加入饱和硫酸铵使其终浓度为50％，于2～6℃静置1～1.5h，进行离心，弃上清，得到第一沉淀，将第一沉淀用等体积的无菌水溶解，再次加入饱和硫酸铵，使其终浓度为30％，离心，弃上清，得第二沉淀，将第二沉淀用等体积的磷酸盐缓冲液溶解。

3.根据权利要求1所述的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，其特征在于，所述步骤四的离心转数为800～1000r/min，离心时间为20～30min。

4.根据权利要求1所述的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，其特征在于，所述免疫鸡蛋选取第三次免疫后10～15天后的鸡蛋。

5.根据权利要求1所述的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，其特征在于，所述步骤一中，所述接种好的鸭胚在培养过程中，每隔8h观察一次。

6.根据权利要求1所述的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，其特征在于，所述步骤二的离心转数为6000～7000r/min，离心时间为25～35min。

7.根据权利要求1所述的可治疗动物病毒病的卵黄抗体制备方法，其特征在于，所述免疫卵黄与无菌水的体积比1:7～8。