[发明专利]一种抗甲苯噻嗪单克隆抗体及其应用

说明书

本发明利用甲苯噻嗪‑BSA偶联物免疫小鼠，再根据杂交瘤技术获得高纯度、高灵敏度和高特异性的抗甲苯噻嗪的单克隆抗体，可用于开发检测甲苯噻嗪的免疫测试产品。所述抗甲苯噻嗪的单克隆抗体能以最快的速度为相关检验检疫部门提供可靠实验室诊断，适用于戒毒所、医院、高危人群普查，特种行业和招工体检工作中筛查以及卫生防疫部门对甲苯噻嗪药物的滥用监管以及食品检查。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，涉及一种抗甲苯噻嗪单克隆抗体及其应用。

背景技术

甲苯噻嗪(xylazine,C12H16N2S)又名甲苄噻嗪、赛拉嗪，是一种广泛使用的兽用镇静止痛剂，有麻醉作用，该化合物通过作用于α2受体和外周神经，起到局部麻醉和肌肉松弛作用。甲苯噻嗪是α2-肾上腺素受体激动剂，全身应用后能产生一定的麻醉作用，麻醉诱导时间短，有良好的镇静和肌松作用，但仅有微弱的镇痛作用，且对呼吸及心脏传导系统有抑制作用，并刺激唾液腺及气管腺体的分泌增加。腹腔注射甲苯噻嗪后可以透过血脑屏障进入大脑，通过激活下丘脑的肽能神经元，使垂体中的脑啡肽和内啡肽的分泌和合成增加，两者进入血液循环调节血管和呼吸系统功能，引起血压下降、呼吸抑制等。

甲苯噻嗪对人的麻醉作用迅速，肌肉注射15-20min、静脉注射1-2min产生作用，药效可持续4小时以上。甲苯噻嗪在体内吸收、代谢、分解快，仅有约8％的原体从尿液排出，口服10-15小时后几乎排泄完全。其在血液中原型物较少，且难以提取净化，易被漏检。因此建立血液中甲苯噻嗪的快速、简便准确的检验方法对相关案件的检验至关重要。

目前，常用的甲苯噻嗪的初筛方法有放射免疫分析法、酶联免疫分析法、免疫层析技术等。确认方法主要用高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC/MS)等理化检测方法。上述方法均需要精密仪器和特定的试验条件，在实际应用中存在了较大的局限。为了解决现场大规模应用的问题，免疫学法由于其检测速度快，成本低，通量高，部分免疫学检测方法(胶体金纸层析法)还具有操作简单，不需要额外设备等优点，倍受重视。因此，开发出优良的甲苯噻嗪诊断用抗原抗体成为了决定免疫学法应用前景的关键。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供一种甲苯噻嗪抗体，可有效提高检测甲苯噻嗪的酶标产品和金标产品的检出率，降低假阳率。它能以最快的速度为相关检验检疫部门提供可靠实验室诊断，适用于戒毒所、医院、高危人群普查，特种行业和招工体检工作中筛查以及卫生防疫部门对甲苯噻嗪药物的滥用监管以及食品检查。

本发明提供一种抗甲苯噻嗪单克隆抗体，所述抗甲苯噻嗪单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列为SEQ ID NO:3～5；所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列为SEQ ID NO:11～13。

进一步地，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:10。

本发明还提供一种抗甲苯噻嗪单克隆抗体，所述抗甲苯噻嗪单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，其特征在于，编码所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的核苷酸序列为SEQ ID NO:6～8；所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3核苷酸序列为SEQ ID NO:14～16。

进一步地，编码所述重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO:1，所述轻链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO:9。

进一步地，所述抗甲苯噻嗪单克隆抗体为完整的抗体或者经处理后具有甲苯噻嗪结合活性的片段。

本发明还提供一种检测样本中甲苯噻嗪的试剂盒，所述试剂盒包括所述抗甲苯噻嗪单克隆抗体。

进一步地，所述样本为尿液。

本发明所述的抗甲苯噻嗪单克隆抗体在甲苯噻嗪免疫检测中的应用。