[发明专利]一种菌核青霉组蛋白去乙酰化酶编码基因PsHOS2及其应用

权利要求书

1.一种菌核青霉组蛋白去乙酰化酶编码基因PsHOS2，其特征在于，所述基因具有(a1)-(a3)中任一所述核苷酸序列：

(a1)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

(a2)与(a1)互补的核苷酸序列；

(a3)与(a1)或(a2)所示的核苷酸序列具有≥90％一致性且编码相同功能蛋白质的核苷酸序列。

2.一种菌核青霉组蛋白去乙酰化酶，其特征在于，所述菌核青霉组蛋白去乙酰化酶的氨基酸序列为如下(b1)-(b3)中任一种：

(b1)SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b2)与SEQ ID NO.2所示的序列具有≥80％序列同一性的序列；

(b3)将(b1)经过一个或几个保守氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同生物活性的由其衍生的蛋白质。

3.一种扩增引物，其特征在于，基于权利要求1所述菌核青霉组蛋白去乙酰化酶编码基因PsHOS2所设计；进一步的，所述扩增引物包括SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示序列。

4.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有权利要求1所述菌核青霉组蛋白去乙酰化酶编码基因PsHOS2；

进一步的，所述重组表达载体通过上述基因有效地连接到表达载体上获得，所述表达载体为病毒载体、质粒、噬菌体、黏粒或人工染色体中的任意一种或多种；进一步优选为真菌质粒；更进一步优选为pFC332质粒。

5.一株工程菌，其特征在于，所述工程菌为抑制权利要求1所述菌核青霉组蛋白去乙酰化酶编码基因PsHOS2及其表达产物表达和/或活性降低的菌株；

具体的，所述工程菌为在出发菌株中敲除组蛋白去乙酰化酶编码基因PsHOS2后获得。

6.如权利要求5所述工程菌，其特征在于，所述出发菌株包括细菌和真菌；进一步的，所述出发菌株为真菌，具体为菌核青霉(Penicillium sclerotiorum)SD-36，其已被中国普通微生物菌种保藏中心保藏，保藏号为CGMCC No.40419，保藏日期为2022年11月10日。

7.如权利要求6所述工程菌，其特征在于，所述工程菌的具体构建方法如下：构建适合青霉菌中表达的Cas9质粒，利用PEG介导的菌核青霉原生质体转化方法转化Cas9质粒，即获得敲除上述菌核青霉组蛋白去乙酰化酶编码基因PsHOS2的重组菌核青霉菌株；

进一步的，含有PsHOS2的靶序列的gRNA表达序列如SEQ ID NO.3所示，使用引物如SEQID NO.4-5所示；

所述菌核青霉为上述菌核青霉(Penicillium sclerotiorum)SD-36。

8.权利要求1所述菌核青霉组蛋白去乙酰化酶编码基因PsHOS2、权利要求2所述菌核青霉组蛋白去乙酰化酶、权利要求4所述重组表达载体和/或权利要求6-7任一项所述工程菌在如下任意一种或多种中的应用：

c1)提高菌核青霉次级代谢产物丰富度；

c2)提高菌核青霉产嗜氮酮类化合物能力；

c3)提高菌核青霉在医药领域中的应用效果；

进一步的，所述菌核青霉为上述工程菌，具体为菌核青霉工程菌。

9.如权利要求8所述应用，其特征在于，所述c2)中，所述嗜氮酮类化合物至少包括核丛青霉素。

10.如权利要求8所述应用，其特征在于，所述c3)中，所述应用具体包括为嗜氮酮类化合物(包括核丛青霉素)的相关新药研发提供向导化合物；进一步的，所述应用为提高菌核青霉在制备嗜氮酮类化合物(包括核丛青霉素)相关药物中的应用效果。