[发明专利]甲基化位点作为子宫内膜异位症分子诊断标志物的应用

说明书

本发明公开了甲基化位点作为子宫内膜异位症分子诊断标志物的应用。本发明发现了用于子宫内膜异位症诊断的生物标记物，该标记物为DNA片段上的1个CpG位点，该甲基化标记物的位点为：chr4：6318317；可以通过检测这个CpG位点的甲基化水平诊断子宫内膜异位症，同时还能区分不同子宫内膜异位症疾病类型。具体表现为子宫内膜异位症患者的异位病灶组织chr4：6318317的甲基化率低于在位子宫内膜组织，并且卵巢子宫内膜异位症患者的异位病灶组织chr4：6318317的甲基化率低于腺肌症患者的异位病灶组织。通过ROC曲线分析发现具有非常高特异性和敏感性，具有诊断价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及甲基化位点作为子宫内膜异位症分子诊断标志物的应用。

背景技术

子宫内膜异位症是一种慢性妇科疾病，表现为子宫内膜样组织生长于宫腔外的组织器官上。以为子宫内膜组织受激素调节呈月经周期性的增殖和脱落，从而引起局部炎症和疼痛甚至降低孕龄期患者的受孕率。受限于现有的诊断方法，子宫内膜异位症患者往往得不到及时的诊断，从而严重影响患者给治疗和康复。现有影像学的检查手段对微小的病灶检出率低，甚至会出现漏诊和误诊。现有的和已报道的子宫内膜异位症相关标记物对于子宫内膜异位症诊断的灵敏度和特异性均不理想，如CA125、PGP9.5、P450和尿液VDBP等。因此，急需适于子宫内膜异位症的高灵敏度和高特异性的生物学诊断标记物。

DNA的甲基化修饰是疾病发生的早期事件之一，它能通过引起染色体构象改变来抑制基因的表达，从而疾病的发生和进展。有报道指出，异位子宫内膜组织存在异常的DNA甲基化修饰，如GATA6、GATA2和HOXA10等基因的启动子区和编码区。这些异常修饰的甲基化位点具备较好的特异性并且甲基化位点的甲基化率也能用荧光定量PCR(qPCR)或数字PCR(ddPCR)的手段进行检测。因此，子宫内膜异位症的甲基化位点具备作为疾病诊断标记物的潜力。

发明内容

本发明的目的在于提供定量检测chr4：6318317甲基化作为生物标志物在制备诊断子宫内膜异位症和/或子宫腺肌症的产品中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一方面，提供定量检测chr4：6318317甲基化水平的试剂在制备诊断子宫内膜异位症和/或子宫腺肌症的产品中的应用。

在本发明的一些实施方式中，所述试剂包括通过甲基化特异性PCR、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和荧光定量法中的至少一种方法检测chr4：6318317甲基化水平的试剂。

在本发明的一些实施方式中，所述试剂包括引物、探针。

在本发明的一些实施方式中，所述引物的序列包括：

Primers F：5’-GTTATAGTGTTAGGTGGAA-3’；

Primers R：5’-CATATTCTCTTATCTCTATACA-3’。

在本发明的一些实施方式中，所述探针的序列包括：

probes M：5’-GTTTTTAAAATTCGGATAATGGA-3’；

probes NM：5’-GTTTTTAAAATTTGGATAATGGA-3’。

在本发明的一些实施方式中，所述探针的5’端连接有荧光报告基团，所述探针的3’端连接有淬灭基团。

在本发明的一些优选实施方式中，所述报告基团选自FAM、ROX、VIC、HEX、TET、JOE、NED、Cy5、Cy3。