[发明专利]一种驼乳源小分子肽及其应用

说明书

本发明公开了一种驼乳源小分子肽，小分子肽的氨基酸序列为Pro‑Phe‑Pro‑Met‑Trp‑Thr‑Phe‑Leu‑Ser‑Arg，分子量为1281.64Da；将本发明小分子肽应用在制备二肽基肽酶Ⅳ抑制剂中，结果显示其具有二肽基肽酶Ⅳ抑制活性，对二肽基肽酶Ⅳ的抑制率为76%，半抑制浓度（IC₅₀）为0.732 mg/mL；本发明小分子肽应用于制备治疗或辅助治疗2型糖尿病的功能食品、保健品和药物，且制备简单，适用于工业化生产和市场推广应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种来源于发酵驼乳的小分子肽及其在制备二肽基肽酶Ⅳ抑制剂中的应用。

背景技术

糖尿病是目前全球性的公共卫生难题。糖尿病患者长期处于高血糖状态，极易诱发如周围神经病变、血管病变、视觉系统异常、内分泌代谢紊乱等各种并发症，严重影响着患者的身体健康和生活质量。

糖尿病是由体内胰岛素分泌不足、胰岛素抵抗或两者同时存在而引起血糖、脂肪、蛋白质代谢紊乱而诱发的慢性代谢性疾病，主要特征是血糖水平长期处于高水平的状态。糖尿病可分为1型糖尿病（Type1 Diabetes Mellitus，T1DM）、2型糖尿病（Type2 DiabetesMellitus，T2DM）、妊娠糖尿病（Gestational Diabetes Mellitus，GDM）和其他特殊糖尿病，其中患有T2DM的患者约占90％。目前已有多类降血糖药物，例如DPP-4抑制剂类、α-葡萄糖苷酶抑制剂类、胰高血糖素样肽-1受体激动剂类等，其中DPP-Ⅳ抑制剂是较新的靶点药物之一，在临床上已经得到了较好的疗效。但是目前常用的DPP-IV抑制剂多为化学合成，长期服用容易引起会产生如过敏反应、心率失调、上呼吸道感染、胃肠不适等副作用。相比之下，食源性DPP-IV抑制多肽因具有制作方式简便、成本低廉、副作用小等优点，因此人们越来越倾向于预防保健和食疗。乳源中骆驼乳的营养物质含量较高且不含β-乳球蛋白，过敏性较低，易消化、吸收和代谢，据报道酸驼奶对糖尿病具有一定的疗效，而酸驼奶是由乳酸菌和酵母菌共发酵的驼乳制成的，因此酸驼奶是分离纯化DPP-Ⅳ抑制剂的理想蛋白源，并且具有广泛的应用前景。

发明内容

本发明提供了一种小分子肽，其来源于发酵驼乳，该小分子肽的氨基酸序列为Pro-Phe-Pro-Met-Trp-Thr-Phe-Leu-Ser-Arg，分子量为1281.64Da，将其用于制备二肽基肽酶Ⅳ抑制剂，结果表明其具有二肽基肽酶Ⅳ抑制活性。

本发明所述的二肽基肽酶Ⅳ抑制剂的成分（或有效成分）为上述小分子肽，还可以加入一种或多种药物、食品可接受的辅料，以改善药物、食品吸收效果或便于使用，制成适宜的使用剂型，如制成胶囊或丸剂、粉剂、片剂、粒剂、口服液和注射液等，即制成药剂学上适宜的使用剂型，或食品领域适宜的食用方式；可应用于制备治疗或者辅助治疗2型糖尿病的功能食品、保健品和药物。

本发明目的通过如下方案实现：

 （1）菌种活化：将酵母菌接种至YPD液体培养基中，在22~39℃、60~250rpm下培养8~46h，传2~4代，接种量为体积百分比0.1~4%，活化后菌液的活菌数不少于10⁸CFU/mL，备用，所述酵母菌为单孢酿酒酵母、解脂耶氏酵母、德克酵母、毕赤酵母中的一种或几种；将乳酸菌接种至MRS液体培养基中，在25~40℃、0~150rpm下培养20~72h，传2~4代，接种量为体积百分比的0.1~4%，活化后菌液的活菌数不少于10⁹CFU/mL，备用，所述乳酸菌为保加利亚乳杆菌、瑞士瑞杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳球菌、嗜热链球菌中的一种或几种；

（2）鲜驼乳的发酵：鲜驼乳在60~150℃下灭菌1~30min，降至室温后接种活化好的酵母菌和乳酸菌，接种量为0.1~5%，进行发酵；发酵条件为20～40℃、摇床转速为50~300rpm、发酵时间为12~100h后；发酵完毕的驼乳调节pH至4.0~4.8，在4℃、3000~12000g下离心5~20min，取上清用NaOH调节pH至7.0~8.0，4℃、3000~12000g离心5~20min取上清用冻干机冻干，收集冻干粉；