[发明专利]一种筛查和鉴定MYB重排相关基因的引物和探针，以及组合检测方法和试剂盒

说明书

本发明涉及使用荧光PCR技术筛查和鉴定MYB重排相关基因的引物探针，组合检测方法及试剂盒，筛查及鉴定MYB基因重排相关的10种基因，分别为MYB‑GATA1、MYB‑NFIB、MYB‑AHI1、MYB‑QKI、MYB‑MNX1、MYB‑ESR1、MYB‑SLC45A2、MYB‑ACTG1、MYB‑FAM111A、MYB‑MCF2。可用于快速检测MYB重排相关基因表达量的情况，特异性好，灵敏度高，自动化程度高，操作简单，有较大的线性范围。可广泛应用于临床上了解MYB重排相关的10种基因所涉及的相关疾病的早期诊断和靶向治疗，指导个性化治疗的方案选择和预后判断提供参考依据，对肿瘤的研究有重要的参考意义，同时有针对性地进行微小残留病灶靶标的监控，预测复发风险。

技术领域

本发明属于疾病基因检测中重排基因的检测领域，涉及特别涉及一种采用多重荧光PCR技术筛查MYB重排相关的10种基因的引物及探针、组合检测方法和试剂盒。

技术背景

染色体重排常见于血液系统中的恶性肿瘤转基因表达产生的异常转录本和相应的融合蛋白中。绝大多数的恶性血液病和肿瘤的发生和发展过程中都会伴有基因的突变或融合，监控恶性血液病和肿瘤患者的基因突变和融合情况，对疾病的诊断分型、预后判定、治疗指导等具有重要的应用价值。

MYB是最早发现的一种原癌基因，具有强效致癌作用。MYB重排涉及的断裂位点的伴侣基因众多，因而产生的融合和重排的基因种类也繁多。据研究发现，该基因和疾病其他相关基因可形成的十几种基因融合，多数融合多发生在血液病及腺状病中，常见的有，腺样囊性癌(包括涎腺腺样囊性癌和乳腺腺样囊性癌)中的MYB-NFIB融合基因：急性淋巴细胞白血病中的MYB-AHL1融合基因，急性髓系白血病(AML)及急性嗜碱性粒细胞白血病(ABL)中MYB-GATA1融合基因，急性淋巴细胞白血病及淋巴细胞淋巴瘤中的MYB-BDP1，MYB-PLAGL1,SLC12A9-MYB,FAM111A-MYB等融合基因。

在目前基因重排的研究中，用于检测重排基因的方法主要包括染色体核型分析、荧光原位杂交(FISH)、实时荧光PCR检测(RQ-PCR)以及二代测序(NGS)。与染色体核型分析和荧光原位杂交技术相比较，实时荧光PCR检测的灵敏度达到10^-5-10^-6,可以进行更快速、更精准的检测重排基因，这也是NCCN指南、ELN指南以及专家共识中所推荐的检测基因重排行之有效的方法。二代测序技术虽然灵敏度也可以达到10^-5-10^-6,但是由于高昂的成本及较长的检测周期限制了其在重排基因检测中的应用。多重荧光RT-PCR可以同时扩增多个目的基因，具有节省时间、降低成本、提高效率的优点，尤其是适用于样本量比较少且检测靶标比较多的项目。因此多重荧光RT-PCR方法在重排基因筛查方面有更大的应用价值。本发明采用荧光PCR技术来得到一种快速，简便及准确筛查和鉴定MYB重排相关基因的方式。适用于大批量样本的临床结合骨髓检查、染色体核型分析、免疫分型等结果综合评估疾病的发生发展；同时有针对性地进行微小残留病灶靶标的监控，预测复发风险。为了解病情进展和治疗效果提供依据，对肿瘤的研究有重要的参考意义。

发明内容

鉴于目前筛查MYB重排相关基因的方法学不能同时满足经济高效、结果准确且能用于监测等需求，故本发明设计出一套用于多重荧光PCR技术检测MYB重排常见基因的引物、探针，并构思出一种灵敏度高，特异性好，检测通量大，快速且准确的筛查及型别鉴定方案。同时通过调整引物、探针浓度比，优化PCR反应条件及反应体系，使扩增效率达到最佳。旨在辅助临床诊断患者重排基因的存在情况，对MYB基因重排所引起的相关疾病的诊断，预后判断、基因层面的靶向治疗、诊断标记物和发病机制等研究提供帮助。