[发明专利]促进体细胞重编程为诱导多能干细胞的培养基及方法有效
| 申请号： | 202310101650.4 | 申请日： | 2023-02-13 |
| 公开（公告）号： | CN115772505B | 公开（公告）日： | 2023-05-19 |
| 发明（设计）人： | 葛啸虎;杨一行;吴迪 | 申请（专利权）人： | 淇嘉科技（天津）有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/071;C12N15/85 |
| 代理公司： | 天津合正知识产权代理有限公司 12229 | 代理人： | 马云云 |
| 地址： | 300452 天津市滨海新区高*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 促进 体细胞 编程 诱导 多能 干细胞 培养基 方法 | ||
1.一种促进体细胞重编程为诱导多能干细胞的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
1）通过电转方法将含有重编程因子的质粒导入尿液细胞或外周血细胞中；
2）将步骤1）得到的细胞在培养基A中培养7-8天，其中，培养基A由基础培养基和添加剂组成，基础培养基为含有1%GlutaMax、1%NEAA、10%FBS的DMEM-F12，添加剂为1μM的TTNPB、15μM的2-PCPA、5μM的RepSox、1-5μM的CHIR99021、0.5-3μM的PFT-α、5-15μM的Y-27632、100-500μM的NaB；
3）之后继续在培养基B中培养6-7天，其中，培养基B由基础培养基和添加剂组成，基础培养基为mTeSR1，添加剂为15μM的2-PCPA、5μM的RepSox、1μM的UNC0379、1-5μM的CHIR99021、0.5-3μM的PFT-α、10-15μM的Y-27632、100-500μM的NaB、0.1-1μM的PD0325901。
2.根据权利要求1所述的促进体细胞重编程为诱导多能干细胞的方法，其特征在于：重编程因子包括OCT4、SOX2、KLF4和C-Myc。
3.根据权利要求2所述的促进体细胞重编程为诱导多能干细胞的方法，其特征在于：质粒为2-5μg的PCEP4-OCT4-IRES-SOX2质粒、0.5-2μg的PCEP4-KLF4质粒和0.5-2μg的PCEP4-C-Myc质粒。
4.一种用于权利要求1-3任一项所述的方法的培养基，其特征在于：所述培养基由培养基A和培养基B组成，其中，培养基A由基础培养基和添加剂组成，基础培养基为含有1%GlutaMax、1%NEAA、10%FBS的DMEM-F12，添加剂为1μM的TTNPB、15μM的2-PCPA、5μM的RepSox、1-5μM的CHIR99021、0.5-3μM的PFT-α、5-15μM的Y-27632、100-500μM的NaB；培养基B由基础培养基和添加剂组成，基础培养基为mTeSR1，添加剂为15μM的2-PCPA、5μM的RepSox、1μM的UNC0379、1-5μM的CHIR99021、0.5-3μM的PFT-α、10-15μM的Y-27632、100-500μM的NaB、0.1-1μM的PD0325901。
5.一种由权利要求1-3任一项所述的方法构建的诱导多能干细胞。
6.权利要求5所述的诱导多能干细胞在建立疾病模型上的应用。
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