[发明专利]一种测定葡萄糖酸内酯有关物质的分析方法

说明书

本发明公开了一种测定葡萄糖酸内酯有关物质的分析方法，(1)制备供试品溶液：取供试品加入稀释液溶解，定量稀释至设定浓度后获得供试品溶液；(2)设置色谱条件：采用三键键合酰胺基键合硅胶为填充剂的色谱柱，采用Hilic分离模式，以酸性水溶液为流动相A，有机溶剂为流动相B，进行等度洗脱，检测波长为205nm～220nm；(3)测定分析：取供试品溶液10μl～50μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算葡萄糖酸‑δ‑内酯及其有关物质葡萄糖酸‑γ‑内酯与葡萄糖酸的含量。本发明实现了葡萄糖酸‑δ‑内酯2个有关物质的定量检测，可高效、准确用于葡萄糖酸‑δ‑内酯有关物质的质量控制，满足研发需求。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，尤其涉及一种测定葡萄糖酸内酯有关物质的分析方法。

背景技术

葡萄糖酸内酯为葡萄糖酸-δ-内酯(Glucono-δ-lactone)的简称，外观为白色晶体或结晶性粉末，极易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚。其水溶液在室温或较低温度下缓慢水解生成葡糖糖酸，温度升高，水解加快。葡萄糖酸-δ-内酯是目前国际上公认的无毒食品添加剂，主要用作牛奶蛋白和大豆蛋白的凝固剂，禽畜肉中的保鲜剂，糕点面包的疏松剂等。此外，还广泛用作合成列净类降糖药的起始物料。

列净类降糖药是一种钠-葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂，该蛋白分布在肾小管，发挥着将原尿中的葡萄糖重吸收回血液的作用。当抑制了SGLT2后，肾小管对葡萄糖的重吸收就会受到抑制，尿糖增多，从而起到降血糖的作用。其中，肾脏葡萄糖重吸收的90％是通过SGLT2蛋白完成的。值得注意的是，SGLT2抑制剂是很安全的，因为他们的降糖效果不依赖于胰岛素，并且空腹会增加肝脏内源性葡萄糖的代偿性生成。

常见列净类降糖药有达格列净(Dapaglifiozin)卡格列净(Canagliflozin)恩格列净(Empagliflozin)及脯氨酸恒格列净(HenagliflozinProline Tablets)等。

以达格列净合成路线为例，从起始物料至最终产品的合成路线式如下：

葡萄糖酸-δ-内酯为合成列净类降糖药的关键起始物料之一，CAS号为：90-80-2，分子式为：C6H10O6，分子量为：178.14，结构式为

通常葡萄糖酸-δ-内酯中可能含有关物质：葡萄糖酸-γ-内酯(异构化五元环杂质)、葡萄糖酸(水解杂质)以及还原糖(参考国标方法GB7657-2020单独检测)。

现有技术中常见关于葡萄糖酸-δ-内酯的分析方法主要分为3种：一种是葡萄糖酸-δ-内酯含量的分析方法，通常采用滴定的方式；一种是显色法，通常参考食品安全国家标准来检测，仅用来鉴别还原糖；还有一种是高效液相色谱法，通常是将葡萄糖酸-δ-内酯作为其他物料中的杂质来控制。但是，现有技术缺少针对上述葡萄糖酸-δ-内酯及其2个有关物质(葡萄糖酸-γ-内酯和葡萄糖酸)的检测方法，不利于研发时对葡萄糖酸-δ-内酯有关物质进行质量控制。

发明内容

发明目的：针对现有技术的不足与缺陷，本发明提供一种测定葡萄糖酸内酯有关物质的分析方法，实现了葡萄糖酸-δ-内酯2个有关物质的定量检测，可高效、准确用于葡萄糖酸-δ-内酯有关物质的质量控制，满足研发需求。

技术方案：本发明的测定葡萄糖酸内酯有关物质的分析方法，包括下述步骤：

(1)制备供试品溶液：取供试品加入稀释液溶解，定量稀释至设定浓度后获得供试品溶液；

(2)设置色谱条件：采用三键键合酰胺基键合硅胶为填充剂的色谱柱，采用Hilic分离模式，以酸性水溶液为流动相A，有机溶剂为流动相B，进行等度洗脱，检测波长为205nm～220nm；