[发明专利]用于编辑植物中的组蛋白H3K27me3的SunTag系统、载体及编辑方法

权利要求书

1.一种用于编辑植物中组蛋白H3K27me3的SunTag系统，其特征在于，所述SunTag系统包括连接有抗原蛋白GCN4的核酸内切酶、连接有抗体蛋白scFv的效应蛋白以及引导RNA；所述引导RNA可将所述连接有抗原蛋白GCN4的核酸内切酶、所述连接有抗体蛋白scFv的效应蛋白定位在待编辑的目标基因上；

其中，所述核酸内切酶为失活的Cas9、失活的Cas12、失活的Cas13、失活的Cas14中的一种，所述效应蛋白为REF6蛋白的无锌指结构域的部分、拟南芥的JMJ13蛋白或拟南芥的JMJ11蛋白。

2.根据权利要求1所述一种用于编辑植物中组蛋白H3K27me3的SunTag系统，其特征在于，所述引导RNA包括七个RNA片段，分别为：如SEQ ID NO：11所示的guide RNA1、如SEQ IDNO：12所示的guide RNA2、如SEQ ID NO：13所示的guide RNA3、如SEQ ID NO：14所示的guide RNA4、如SEQ ID NO：15所示的guide RNA5、如SEQ ID NO：16所示的guide RNA6以及如SEQ ID NO：17所示的guide RNA7。

3.根据权利要求2所述一种用于编辑植物中组蛋白H3K27me3的SunTag系统，其特征在于，所述连接有抗原蛋白GCN4的核酸内切酶为dCas9-10×GCN4，所述连接有抗体蛋白scFv的效应蛋白为scFv-sfGFP-REF6△ZnF。

4.一种用于编辑植物中组蛋白H3K27me3的载体，其特征在于，所述载体采用权利要求1～3任意一项所述的用于编辑组蛋白H3K27me3的SunTag系统构建而成。

5.一种如权利要求4所述的载体的构建方法，其特征在于，采用第一启动子、第二启动子、所述SunTag系统、筛选标记基因、入门载体以及终载体构建所述用于编辑组蛋白H3K27me3的载体；其中，所述第一启动子为两个，分别用于驱动所述连接有抗原蛋白GCN4的核酸内切酶和所述连接有抗体蛋白scFv的效应蛋白；所述第二启动子为用于驱动所述引导RNA的启动子。

6.根据权利要求5所述一种载体的构建方法，其特征在于，所述第一启动子为如SEQ IDNO：1所示的pUBQ10；所述第二启动子包括如SEQ ID NO：7所示的AtU6-1、如SEQ ID NO：8所示的AtU6-29、如SEQ ID NO：9所示的AtU3b以及如SEQ ID NO：10所示的AtU3d。

7.根据权利要求6所述一种载体的构建方法，其特征在于，所述筛选标记基因为潮霉素抗性基因HygR。

8.根据权利要求7所述一种载体的构建方法，其特征在于，所述构建的方法为GreenGate，所述入门载体为pGGA、pGGB、pGGC、pGGD、pGGE和pGGF，所述终载体为pZ304；

构建步骤为：分别构建pGGA-AtU6-1:guide RNA1-AtU6-1:guide RNA2-AtU6-29:guideRNA3-AtU6-29:guide RNA4-AtU3b:guide RNA5-AtU3b:guide RNA6-AtU3d:guide RNA7、pGGB-dCas9-10×GCN4、pGGC-pUBQ10、pGGD-pUBQ10:scFv-sfGFP、pGGE-REF6 △ZnF、pGGF-HygR的载体片段；

再将所述终载体与上述各载体片段依次连接，连接过程中，pGGA、pGGB、pGGC、pGGD、pGGE、pGGF被去除，得到所述用于编辑组蛋白H3K27me3的载体：pZ304-AtU6-1:guide RNA1-AtU6-1:guide RNA2-AtU6-29:guide RNA3-AtU6-29:guide RNA4-AtU3b:guide RNA5-AtU3b:guide RNA6-AtU3d:guide RNA7-pUBQ10:dCas9-10×GCN4-pUBQ10:scFv-sfGFP-REF6 △ZnF-HygR。