[发明专利]一种利用人源化菌群构建孤独症小鼠模型的方法

权利要求书

1.一种利用人源化菌群构建孤独症小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

粪菌悬液的制备；

采用多联抗生素分阶段清除试验小鼠内肠道菌群；

向清除肠道菌群的雌性和雄性小鼠中移植粪菌悬液，合笼，孕鼠分娩后得到的子代鼠即为人源化菌群的孤独症模型鼠。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，粪菌悬液的制备方法为：

(1)粪便稀释液的配置：配置PBS缓冲液，向缓冲液内加入半胱氨酸、甘油；

(2)粪便稀释液灭菌处理；

(3)将来源于临床确诊为儿童孤独症患儿的粪便加入到灭菌后的粪便稀释液中，搅拌均匀后过滤得到粪菌悬液；

(4)将所得粪菌悬液转移至-80℃冰箱保存。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)、(3)均在厌氧工作站内完成，其中厌氧环境要求O₂浓度＜0.2％。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中半胱氨酸浓度为0.05％～0.2％，甘油浓度为10～25％；步骤(3)中粪便稀释液、粪便体积重量比为1-6mL/g；步骤(3)中采用75-100μm的细胞筛过滤。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)处理总时长≤30min，处理结束后立即将所得粪菌悬液转移至-80℃冰箱保存。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用多联抗生素分阶段清除试验小鼠内肠道菌群的方法为：

第一阶段，对试验小鼠采用灌服或饮水方式服用多联抗生素A；第二阶段，对试验小鼠采用灌服或饮水方式服用多联抗生素B；第三阶段，对试验小鼠采用灌服或饮水方式服用多联抗生素A；

多联抗生素A由美罗培南、硫酸新霉素、万古霉素盐酸盐组成；多联抗生素B由氨苄西林、头孢哌酮钠盐、克林霉素盐酸盐组成。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，各阶段将多联抗生素溶解于试验小鼠饮用水中，各类抗生素浓度为0.5～1.5mg/ml，处理至少7天。

8.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述试验小鼠为SPF级C57BL/6小鼠，鼠龄6-8周。

9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，向清除肠道菌群的雌性和雄性小鼠中采用灌胃方式移植粪菌悬液，粪菌悬液灌胃量为100～200μl/只/天，持续1周。

10.权利要求1-9任一项所述方法制备得到的孤独症小鼠模型。