[发明专利]降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法、抗体和细胞培养基

说明书

本申请公开了一种降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法、抗体和细胞培养基，培养方法包括将融合细胞接种至基础培养基中培养，培养过程中添加流加培养基和调节剂；由培养产物中分离得到抗体类蛋白；其中，所述调节剂包括Mnsupgt;2+/supgt;。所述调节剂添加完成后，培养体系中Mnsupgt;2+/supgt;的摩尔浓度为20～30μM。本申请的培养方法能够有效降低抗体蛋白的酸峰比例，并且对碱峰影响较低，相对于现有培养方法，抗体的酸峰比例降低了29.2％，碱峰比例仅提高了4.5％；无需改变工艺控制条件，对细胞生长和目标抗体产量无影响，也不会引起其他法规和安全方面的问题。

技术领域

本申请属于生物制药技术领域，具体涉及一种降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法、抗体和细胞培养基。

背景技术

电荷异质性是由于抗体分子中翻译后修饰及降解的发生导致其等电点或空间电荷分布等表面电荷特性发生了改变，进而导致电荷变体的生成。抗体中的诸多翻译后修饰和降解过程，如糖基化、C末端和N末端修饰、糖化、氧化、聚体、二硫键修饰等都可能引起抗体表面电荷特性的改变和电荷变体的生成。异质性的发生常常会引起抗体生物学活性、药代动力学、热稳定性、免疫原性等抗体结构和功能的改变，是抗体药物的一类关键质量属性。

在电荷异质方面蛋白的酸峰更容易引起蛋白功能活性的改变，而碱峰一般为C端赖氨酸的不完全剪切引起，这种变异通常不会对蛋白活性功能产生影响，因此在抗体生产中酸峰的控制尤为重要。现有技术中调控抗体酸峰的手段主要为降温，降温虽然能降低酸峰，但是会降低酶的活性，影响蛋白表达量，同时降温也会导致碱峰的上升，导致主峰可能并不会增加。

发明内容

本申请的目的在于提供一种降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法、抗体和细胞培养基，以解决现有技术中采用降温手段调控抗体酸峰，会降低酶的活性，影响蛋白表达量，同时降温也会导致碱峰的上升，导致主峰可能并不会增加。

为实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：

提供了一种降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法，包括：

将融合细胞接种至基础培养基中培养，培养过程中添加流加培养基和调节剂；

由培养产物中分离得到抗体类蛋白；

其中，所述调节剂包括Mn²⁺。

在一个或多个实施方式中，所述调节剂添加完成后，培养体系中Mn²⁺的摩尔浓度为20～30μM。

在一个或多个实施方式中，所述调节剂分别在培养的第3、4或5天和第5、6或7天分两次添加至培养体系中。

在一个或多个实施方式中，所述调节剂分别在培养的第4天和第6天分两次添加至培养体系中。

在一个或多个实施方式中，所述流加培养基分别在培养的第3、5、7天分三次添加至培养体系中。

在一个或多个实施方式中，所述调节剂为四水氯化锰溶液。

为实现上述目的，本申请采用的另一个技术方案是：

提供一种上述任一实施方式所述的培养方法培养得到的抗体。

在一个或多个实施方式中，所述抗体的酸峰比例小于15％，主峰比例大于67％。

为实现上述目的，本申请采用的又一个技术方案是：

提供一种细胞培养基，包括基础培养基、流加培养基和调节剂，所述调节剂包括Mn²⁺。

在一个或多个实施方式中，所述细胞培养基中Mn²⁺的摩尔浓度为20～30μM。

在一个或多个实施方式中，所述调节剂为四水氯化锰溶液。