[发明专利]可防治棉花黄萎病的大丽轮枝菌的菌株L6的制备及其应用

说明书

本发明公开了一种可防治棉花黄萎病的大丽轮枝菌的菌株L6的制备及其应用。本发明所提供的菌株为Pseudomonas aeruginosa菌L6，是从河南天冠有限公司提供的厌氧废弃物‑‑沼渣中筛选到的假单胞菌菌属，其保藏编号：CCTCC M 20221084 L6。本发明提供的L6菌株可应用于抑制大丽轮枝菌和防治棉花黄萎病。L6能够在人工培养基上培养，容易获得和培养，以利于工厂化生产和推广应用。L6菌的发酵液对大丽轮枝菌有明显抑制效果，抑菌率高达94.5%。本发明利用生物技术有效的降低了棉花大丽轮枝菌对棉花的危害，同时同化学药剂相比避免了环境污染等方面的问题。

技术领域

本发明属于生物防治植物病害技术领域，具体涉及一种可防治棉花黄萎病的大丽轮枝菌的菌株L6的制备及其应用。

背景技术

棉花黄萎病是棉花生产上最重要的病害之一。素有棉花“癌症”之称，该病是由大丽轮枝菌引起的一种土传性维管束病害，其病原菌存活力强,菌核在土壤中无寄主情况下可存活10多年之久，病原菌群体遗传多样性丰富,易变异等。此外，大丽轮枝菌的寄主范围极广，国外报道可为害38科660种植物，其中农作物184种，杂草153种。

我国经鉴定，寄主植物至少20科80种，大田作物包括向日葵、茄子、辣子、番茄、烟草、马铃薯、甜瓜、西瓜、黄瓜、花生、菜豆、绿豆、大豆、芝麻、甜菜等作物。其中棉花是世界上分布最广、种植面积最大的经济作物之一，也是受危害最为严重的农作物之一，棉花黄萎病是是世界性的危险病害，也是中国棉花生产中的严重病害，并且由于大丽轮枝菌能形成休眠结构的微菌核，其对不良环境有较强的抵抗力，能耐80℃高温和-30℃低温，故在极端条件下可以形成有较强保护作用的微菌核，当外界环境适合其萌发时又可以形成具有较强感病性的真菌状态。我国每年棉花黄萎病的的发病面积将近占全国种植面积的15％～20％，严重年份甚至可以达到50％之多，有些病害严重的种植区域可能会发生绝收的现象。黄萎病不但降低了棉花的产量而且也会降低棉花的纤维品质、种子产量和种子的产油量等，进而造成较为严重的经济损失。

发明内容

针对现有技术问题，提供一种菌株易培养、对大丽轮枝菌的防治效果高、对环境污染小等益处的可防治棉花黄萎病的大丽轮枝菌的菌株L6的制备及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明所提供的菌株为Pseudomonas aeruginosa菌L6，是从河南天冠有限公司提供的厌氧废弃物--沼渣中筛选到的假单胞菌菌属，已于2022年07月11日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：湖北省武汉市武昌区八一路229号武汉大学校内)，保藏编号：CCTCCM20221084。其具有以下生物学特性：在LB平板培养基上菌落呈圆形，饱满，表面湿润光滑，菌苔呈深绿色；在100倍油镜下观察形态为椭圆状细菌、革兰氏阴性菌，具有固氮、解磷等性质，能产糖基转移酶、碳水化合物酯酶、糖苷水解酶等。

L6菌株的分离方法为：取河南天冠有限公司提供的厌氧废弃物--沼渣5g，加入到含有100mL无菌水的三角瓶中与37℃、200rpm摇床中培养12h，于超净工作台中取1mL上清液稀释涂布到LB固体培养基中，与37℃恒温箱培养12h，然后用接种环挑出不同的单菌落转接于LB固体平板进行纯化用于后续的生物活性测试，由此筛选得到菌株L6。

本发明提供了L6菌株的培养方法：

(1)试管种培养

LB液体培养基配方为：0.5％酵母提取物，1％蛋白胨，1％NaCl，余下为水。

将L6菌假单胞菌体接种到上述培养基上，37℃下培养12h，获得试管种。

(2)液体扩大培养

LB液体培养基配方为：0.5％酵母提取物，1％蛋白胨，1％NaCl，余下为水。