[发明专利]抗虫耐除草剂玉米转化事件LD05的核酸分子、检测方法及其应用

说明书

本发明涉及一种抗虫耐除草剂玉米转化事件LD05的核酸分子、检测方法及其应用，所述玉米转化事件LD05的核酸分子包括SEQ ID NO:1所示序列或其反向互补序列、或者SEQ ID NO:2所示序列或其反向互补序列。本发明玉米LD05具有抗虫和耐草铵膦除草剂特性且农艺性状优良，检测方法可以准确快速地鉴定生物样品中是否包含转基因玉米事件LD05的DNA分子。

技术领域

本发明涉及植物生物技术领域。具体的说，涉及抗虫耐除草剂玉米转化事件LD05的核酸分子、检测方法及其应用，特别是涉及一种抗虫和耐受草铵膦除草剂施用的转基因玉米事件LD05和用于检测生物样品中是否包含特定转基因玉米事件LD05的核酸序列及其检测方法。

背景技术

玉米是我国种植面积最广的农作物，2015年种植面积5.7亿亩，产量2.2亿吨，种植面积和总产量都达到了我国粮食作物总种植面积和总产量的1/3。培育抗虫耐除草剂转基因玉米品种，推广转基因玉米将是我们提升单产，实现供需平衡，保证粮食安全的有效手段。

玉米的整个生育期会受到多种虫害的影响，其中，玉米螟是玉米生产上的主要害虫，每年可导致约10％的减产。

Cry1Ab蛋白首次由孟山都公司开发成抗虫玉米MON810，旨在提高对亚洲玉米螟(ACB)等野杆螟属(Ositrinia species)害虫的抗性。Vip3Aa首次由先正达公司应用到转基因玉米MIR162中，对小地老虎Agrotis ypsilon、玉米穗蛾Helicoverpa armigera、豆白隆切根虫Loxagrotis albicosta和草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda具有显著的控制作用。M2cryAb-vip3A蛋白是通过人工合成的方法，将Cry1Ab和Vip3Aa蛋白的主要结构域组合而成。M2cryAb-vip3A蛋白的主要优点有：(1)扩大抗虫谱，同时含有两种蛋白的功能结构域，预期对玉米螟、棉铃虫、粘虫、草地贪夜蛾均有抗性；(2)有利于靶标害虫抗性管理，大量研究表明，Vip3对多种鳞翅目害虫有很高的杀虫活性，拓展了Bt蛋白的杀虫谱，同时Vip3毒素和Cry毒素的杀虫机理存在差别，在进化上没有同源性，害虫对这两种毒素产生交互抗性的机率很小；(3)减少玉米果穗及籽粒中真菌毒素的水平，提高玉米籽粒品质；(4)蛋白序列中不含有过敏原序列，在保持高效杀虫活性的同时兼具生物安全性。

田间杂草与作物竞争水、肥、光能及生长空间，直接影响农作物产量与质量。同时许多杂草又是作物病原菌及害虫的中间寄主，是作物增产的重要生物限制因子之一。农业种植的规模化和机械化是一个可预见的趋势，这使得传统的人工除草方式变得不现实。除草剂的推广使用，可大幅度减少棉田管理用工，降低劳动强度。开发高效、低毒、无残留的除草剂新产品，费用高、耗时长难度大。通过转基因技术培育耐灭生性除草剂的玉米可以克服这一难题。在玉米生长期喷施1-2次就能有效解决杂草问题，减少了除草剂的用量及投入成本。因此，耐除草剂转基因玉米具有非常广阔的应用价值和市场潜力。

本发明将抗虫基因表达盒与耐除草剂表达盒串联，使其在转基因玉米中高效表达，兼具抗虫和耐除草剂性状，进一步增强了该产品的应用和经济价值。