[发明专利]猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体纳米颗粒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体纳米颗粒，由猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体和I53‑50A的复合物与I53‑50B蛋白组装得到；所述猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体和I53‑50A的复合物由第一重组载体经转染、表达、纯化而得；所述第一重组载体包括第一载体和连接于所述第一载体上的第一核苷酸序列，所述第一核苷酸序列由如SEQ ID No.1所示的第一氨基酸序列通过哺乳动物细胞密码子优化后得到。本发明提供的猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体纳米颗粒为开发针对PEDV安全、高效的广谱纳米颗粒疫苗提供有效途径。

技术领域

本发明涉及猪流行性腹泻病毒疫苗开发技术领域，尤其涉及一种猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体纳米颗粒的制备方法。

背景技术

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)属于冠状病毒科，α冠状病毒属，是一种有囊膜的单股正链RNA病毒。PEDV感染能够引起猪急性肠道疾病，临床症状表现为急性水样腹泻、呕吐、脱水等，在新生仔猪中死亡率高。

PEDV基因组全长约28kb，包含至少七个开放阅读框(open reading frame，ORF)，共编码4个结构蛋白—纤突蛋白S；膜蛋白M；囊膜蛋白E；核衣壳蛋白N。其中S蛋白是PEDV主要的囊膜蛋白，属于I型糖蛋白，蛋白大小约200kDa，以三聚体的形式分布在病毒颗粒的表面，在病毒入侵过程发挥重要作用。S蛋白分为两个结构域—S1和S2，S1包含两个结构域—N-terminal domain(NTD)和C-terminal domain(CTD)，功能上主要介导病毒和细胞受体的结合，S2介导病毒囊膜和细胞膜的融合。S蛋白是决定病毒毒力的主要蛋白，可以诱导机体产生中和抗体。

冠状病毒S蛋白具有良好的免疫原性，在病毒表面均呈现三聚体结构，体外表达S蛋白的三聚体形式与病毒表面天然的S蛋白结构更为接近，因此S蛋白三聚体与S蛋白单体相比可以诱导产生更强的免疫反应。S蛋白为三聚体，具有融合前和融合后两个不同的结构状态。免疫系统识别病毒融合前状态对建立有效的免疫反应至关重要，但是融合前状态不稳定，容易向S蛋白融合后状态转变，导致免疫应答反应降低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体纳米颗粒，其能够稳定地维持融合前的构象状态，有利于刺激机体产生更强的免疫反应。

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体纳米颗粒的制备方法，其为开发针对PEDV安全、高效的广谱纳米颗粒疫苗提供有效途径。

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体纳米颗粒的应用。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体纳米颗粒，由猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体和I53-50A的复合物与I53-50B蛋白组装得到；

所述猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体和I53-50A的复合物由第一重组载体经转染、表达、纯化而得；

所述第一重组载体包括第一载体和连接于所述第一载体上的第一核苷酸序列，所述第一核苷酸序列由如SEQ ID No.1所示的第一氨基酸序列通过哺乳动物细胞密码子优化后得到。

在一种实施方式中，所述第一载体为pRK5。

在一种实施方式中，所述I53-50B蛋白由I53-50B重组载体经转染、表达、纯化而得；

所述I53-50B重组载体包括第二载体和连接于所述第二载体上的第二核苷酸序列，所述第二核苷酸序列由如SEQ ID No.2所示的第二氨基酸序列通过大肠杆菌密码子优化后得到。

在一种实施方式中，所述第二载体为pET-29a。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种猪流行性腹泻病毒S蛋白三聚体纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：