[发明专利]抗体组合物及应用、检测血液中YKL-40浓度的方法

权利要求书

1.抗体组合物，其特征在于，包括以下组分：

YKL-40重组蛋白、抗YKL-40鼠源单抗、抗YKL-40兔源多抗、山羊抗体共轭辣根过氧化酶、3,3’,5,5’-四甲基联苯胺和硫酸。

2.根据权利要求1所述的抗体组合物，其特征在于，所述YKL-40重组蛋白的制备方法包括以下步骤：

将YKL-40全基因序列引入到pFAST-BAC1质粒中，然后，引入杆状病毒质粒，产生杆状病毒传染于昆虫Sf9细胞，收集分泌YKL-40蛋白的细胞上清液，在所述收集分泌YKL-40蛋白的细胞上清液中分离、纯化得到所述YKL-40重组蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的抗体组合物，其特征在于，检测血液中YKL-40浓度的方法，所述抗YKL-40鼠源单抗的制备方法包括以下步骤：

将所述YKL-40重组蛋白注射于小鼠，分离所述小鼠脾脏的免疫B细胞，然后与小鼠淋巴瘤的腹水肿瘤细胞进行杂交培养，筛选能产生与YKL-40蛋白特异结合的抗体杂交瘤细胞，培养并收集所述抗体杂交瘤细胞的上清液，在所述抗体杂交瘤细胞的上清液中分离、纯化得到所述抗YKL-40鼠源单抗。

4.根据权利要求1或2所述的抗体组合物，其特征在于，所述抗YKL-40兔源多抗的制备方法包括以下步骤：

将所述YKL-40重组蛋白C末端的肽段注射于兔的血液中，收集所述兔的血清；从所述兔的血清中分离、纯化得到所述抗YKL-40兔源多抗；

优选地，由C端至N端，所述YKL-40重组蛋白C末端的肽段包括：CGQDLRFPLTNAIKDALAAT。

5.根据权利要求1所述的抗体组合物，其特征在于，所述抗YKL-40鼠源单抗的浓度为0.3～1.0mg/ml；

优选地，所述抗YKL-40兔源性多抗的浓度为0.3～1.0mg/ml；

优选地，所述山羊抗体共轭辣根过氧化酶的浓度为0.5～0.8mg/ml；

优选地，所述3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的浓度为0.2～0.4mM；

优选地，所述硫酸的浓度为1.8～2.2M。

6.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1～5任一项所述的抗体组合物。

7.检测血液中YKL-40浓度的方法，使用权利要求1～5任一项所述的抗体组合物或权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：

a、将抗YKL-40鼠源单抗加入至96孔板后3～5℃过夜；移去所述96孔板中的所述抗YKL-40鼠源单抗，冲洗所述96孔板；

b、向所述96孔板中加入待测血液样本，于3～5℃冰箱过夜；移去所述96孔板中的所述待测血液样本，冲洗所述96孔板；

c、向所述96孔板中加入抗YKL-40兔源性多抗，于3～5℃静置过夜；移去所述96孔板中的所述抗YKL-40兔源性多抗，冲洗所述96孔板；

d、向所述96孔板中加入山羊抗体共轭辣根过氧化酶，室温放置1.5～2.5h；移去所述96孔板中的所述山羊抗体共轭辣根过氧化酶，向所述96孔板中加入3,3’,5,5’-四甲基联苯胺，进行震荡培养；

e、向所述震荡培养结束后的培养体系中加入硫酸，在450nm波长处检测加入所述硫酸后培养体系的吸光度；

f、利用YKL-40重组蛋白制作YKL-40浓度与吸光度相关的标准曲线。

8.根据权利要求7所述的检测血液中YKL-40浓度的方法，其特征在于，所述抗YKL-40鼠源单抗的浓度为0.3～1.0mg/ml；

优选地，所述抗YKL-40兔源性多抗的浓度为0.3～1.0mg/ml；

优选地，所述山羊抗体共轭辣根过氧化酶的浓度为0.5～0.8mg/ml；

优选地，所述3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的浓度为0.2～0.4mM；

优选地，所述硫酸的浓度为1.8～2.2M。