[发明专利]mRNA的制备方法在审
| 申请号： | 202310136404.2 | 申请日： | 2023-02-20 |
| 公开（公告）号： | CN116286793A | 公开（公告）日： | 2023-06-23 |
| 发明（设计）人： | 张海峰;陈慧;刘欣;宋恒远;马宏丹;张劲松;代亚东;张胜 | 申请（专利权）人： | 苏州博腾生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 苏婕 |
| 地址： | 215021 江苏省苏州市苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | mrna 制备 方法 | ||
1.一种mRNA的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：
提供线性DNA转录模板；所述线性DNA转录模板包括正义链和反义链；所述正义链包括启动子和目的DNA，所述启动子与所述目的DNA之间设有限制性酶切位点；
所述线性DNA转录模板于体外转录体系中进行第一阶段转录，制备第一阶段转录产物；
向所述第一阶段转录产物中加入识别所述限制性内切酶位点的限制性内切酶X，进行第二阶段转录，制备所述mRNA。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述限制性内切酶X选自为SpeⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中的一种。
3.根据权利要求1所述的mRNA的制备方法，其特征在于，第二阶段转录的时间为15min～120min。
4.根据权利要求1至3任一项所述的mRNA的制备方法，其特征在于，所述体外转录体系包括IVT转录体系。
5.根据权利要求1至3任一项所述的mRNA的制备方法，其特征在于，第一阶段转录的时间为15min～120min。
6.根据权利要求1至3任一项所述的mRNA的制备方法，其特征在于，所述启动子选自T7启动子、T3启动子和SP6启动子的一种。
7.根据权利要求1至3任一项所述的mRNA的制备方法，其特征在于，所述目的DNA选自功能性基因、基因杂合体、基因变体和杂合体的一种或几种。
8.根据权利要求1至3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述线性DNA转录模板的制备步骤包括：
构建环状质粒DNA；
采用限制性内切酶Y酶切所述环状质粒DNA，制备所述线性DNA转录模板；
所述限制性内切酶Y与所述限制性内切酶X识别的酶切位点不同；可选地，所述限制性内切酶Y选自BspQⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中的一种。
9.根据权利要求8所述的mRNA的制备方法，其特征在于，所述线性DNA转录模板的制备步骤还包括对获得的所述线性DNA转录模板进行纯化处理。
10.根据权利要求1至3和9任一项所述的mRNA的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括：对第二阶段转录完成后，向所得产物中加入DNaseⅠ酶，酶切消化所述线性DNA转录模板，并对所得酶切消化产物进行纯化处理。
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