[发明专利]两个特异识别Omicron突变株和Delta突变株的DNA核酸适配体

说明书

本发明公开了两个特异识别Omicron突变株和Delta突变株的DNA核酸适配体，用于特异识别SARS‑CoV‑2Omicron突变株的核酸适配体的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示；用于特异识别SARS‑CoV‑2Delta突变株的核酸适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。实验证明，相比于商业试剂盒，用上述核酸适配体构建的nanoFPI传感器在检测SARS‑CoV‑2假病毒的灵敏度上提高了1000‑100000倍，达到0.4TCID₅₀/mL；且可以特异地识别SARS‑CoV‑2Omicron突变株和SARS‑CoV‑2Delta突变株。本发明提供的方法成本低、耗时短，既适合普通家用，也可以在专业的检测中心进行大规模应用。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及两个特异识别Omicron突变株和Delta突变株的DNA核酸适配体。

背景技术

随着SARS-CoV-2的广泛传播，许多病毒突变株出现，其中SARS-CoV-2奥米克戎突变株(即Omicron突变株)、SARS-CoV-2德尔塔突变株(即Delta突变株)、SARS-CoV-2贝塔突变株(即Beta突变株)和SARS-CoV-2伽马突变株(即Gamma突变株)已被世卫组织定位需要受关注的突变株(Variantof Concern，VOC)。这些突变株相对传播能力更强，并对特异性药物和疫苗效果有一定的影响。

当前，主流的SARS-CoV-2检测方法是定量PCR(quantitative reverse-transcription real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)。虽然该方法灵敏度高且特异性强，但是仍有很多缺点限制了它的大规模应用，例如该方法包括RNA的提取、RNA反转录成DNA和定量检测等步骤，每个步骤不仅耗时耗力，还需要很多昂贵的化学试剂，同时对操作环境和人员技术要求高。由此可见，检测SARS-CoV-2不能仅仅依靠荧光定量的方法，还需要开发更便捷、迅速的方法作为补充。

目前，市面上出现了新冠抗原检测试纸。与荧光定量检测相比，新冠抗原检测试纸的成本显著降低，同时不仅可以在15分钟内得到结果，而且不依赖核酸检测所需的专业人员、精密仪器和实验环境，可以满足大规模人群筛查和在欠发达地区应用的需求。但是，由于新冠抗原检测试纸是基于抗体开发的，所以它有很多缺点，例如抗体是由哺乳动物的免疫反应产生的，这一过程耗时长；抗体是蛋白，非常容易变性，分子量偏大，保质期短；不同批次间的性质很难保持稳定等等。

核酸适配体(aptamer)作为抗体的类似物，其具有抗体的类似功能，但规避了抗体的上述缺点。核酸适配体是单链的核苷酸，能够与靶标高特异性、高亲和力的结合。SELEX(systemic evolution of ligands by exponential enrichment)技术是上世纪90年代发展起来的一项体外筛选技术，它可以高效地从随机寡核苷酸分子文库中分离获得可以特异结合靶分子的寡核苷酸片段。筛选得到核酸适配体的序列后，可以用化学合成的方法获得。因此，与抗体相比，核酸适配体的分子量小、批次差异小、免疫原性低、更容易保存且易于化学修饰。这些优势使得核酸适配体非常适合作为传感器中分子识别元件(molecularrecognition elements，MREs)来使用。目前还没有筛选到能够特异识别某个SARS-CoV-2突变株的核酸适配体。因此，尚且不能通过核酸适配体识别和区分不同的SARS-CoV-2突变株。

发明内容

本发明的目的是提供可以识别和区分SARS-CoV-2突变株(如Omicron突变株、Delta突变株)的核酸适配体，进而快速、方便、有效地检测SARS-CoV-2。