[发明专利]小鼠颅内动脉瘤破裂模型的构建方法

说明书

本申请提供了一种小鼠颅内动脉瘤破裂模型的构建方法，包括：对小鼠实施单侧颈动脉结扎、单侧肾切除以及枕大池注射弹力蛋白酶，其中，所述弹力蛋白酶的注射剂量为45‑55mU。通过将枕大池注射、高血压、单侧颈动脉结扎等操作结合，在保证死亡率较低的情况下，给以特定的弹力蛋白酶的注射剂量，从而提供一种操作简单、注射过程可视以保证稳定性、成瘤率及破裂率均较高的小鼠颅内动脉瘤破裂模型。

技术领域

本申请属于疾病动物模型构建方法技术领域，具体涉及一种小鼠颅内动脉瘤破裂模型的构建方法。

背景技术

颅内动脉瘤是颅内动脉管壁上的异常膨出，其病因尚不明确，多数学者认为颅内动脉瘤与动脉壁局部的先天性薄弱和瘤腔内压力增高有关，高血压、动脉硬化、血管炎等可促进颅内动脉瘤的发生发展。颅内动脉瘤一旦破裂出血，致死、致残率极高。动脉瘤体内模型是研究动脉瘤发生发展机理的重要工具。

目前颅内动脉瘤的体内模型包括犬、兔、大鼠、小鼠等模型。不同模型可用于模拟动脉瘤的发生、生长、破裂、血管内治疗、术后愈合、复发等不同阶段，目前只有小鼠颅内动脉瘤模型可模拟动脉瘤的破裂过程。

2012年Makino等人首次发明了可破裂的小鼠颅内动脉瘤模型，通过结扎一侧肾动脉、皮下泵入血管紧张素II及高盐饮食成功诱导高血压，在此基础向上向小鼠基底池立体定向注射弹力蛋白酶诱导破裂动脉瘤。此后Wada等人在高血压诱导药物、立体定向注射坐标、弹力蛋白酶的剂量、是否结扎肾动脉及颈动脉、高盐饲料浓度、等实验细节上进行不断探索及优化，但高血压诱导及脑立体定向注射弹力蛋白酶始终为诱导破裂动脉瘤的两个最基本条件。Wada、等人改进后的动脉瘤发生率为68%-90%不等，破裂率为50-76%不等。

现有的小鼠破裂动脉瘤模型均依赖向基底池立体定向注射弹力蛋白酶诱导，该手段存在以下弊端：（1）立体定向折射操作难度大，需要大量时间练习，立体定向注射诱导的动脉瘤模型对操作准确性要求极高，弹力蛋白酶的注射位置为靠近Willis环的脑脊液中，理想的注射效果为弹力蛋白酶能削弱血管壁，但不至于溶解血管全层造成出血。导致实际操作过程中，鼠脑前后左右调平及寻找注射坐标时必须准确规范，否则注射位置距离Willis环较远，则动脉瘤的成瘤率和破裂率偏低，注射位置距离Willis环较近，则立体定向注射后出血率、死亡率极高，同时，颅骨钻孔、微量注射针从钻孔处穿越脑组织至颅底基底池操作本身会造成一定死亡率。（2）弹力蛋白酶注射导致的术后出血率、死亡率高。目前所发现的立体定位坐标均是将弹力蛋白酶注射至离颅底Willis环较近的基底池中，弹力蛋白酶局部浓度过高可直接腐蚀血管造成颅内出血死亡。（3）弹力蛋白酶在颅底血管扩散不均导致模型稳定性差。（4）严重依赖脑立体定位仪、微量泵等高值仪器。

发明内容

本申请的目的在于提供一种无需依赖立体定位装置的小鼠颅内动脉瘤破裂模型的构建方法，其操作更简单，且至少能够降低模型动物的死亡率。

本申请第一方面提供了一种小鼠颅内动脉瘤破裂模型的构建方法，其包括：

对小鼠实施单侧颈动脉结扎以模拟局部血流动力学改变；实施单侧肾动脉结扎或肾切除以模拟肾源性高血压；以及实施枕大池注射弹力蛋白酶以模拟血管壁局部薄弱；其中，所述弹力蛋白酶的注射剂量为45-55mU；优选地，所述小鼠为C57BL/6J小鼠，周龄为8-10周。

本申请第二方面提供了采用本申请第一方面的方法建立的小鼠颅内动脉瘤破裂模型，其动脉瘤发生率为75-80%，破裂率为70-72%，且造模死亡率不超过10%。

本申请通过将枕大池注射、高血压、单侧颈动脉结扎等操作结合，在保证死亡率较低的情况下，给以特定的弹力蛋白酶的注射剂量，从而提供一种操作简单、注射过程可视以保证稳定性、成瘤率及破裂率均较高的小鼠颅内动脉瘤破裂模型。

具体地，采用枕大池注射弹力蛋白酶的方式，使得操作难度大大降低，该注射位置可以显微镜下手动注射，摆脱了对脑立体定位仪、微量泵等高值仪器的依赖；