[发明专利]一种基于磁性共价有机框架和适配体修饰的金纳米粒子的鼠伤寒沙门氏菌的检测方法

说明书

本发明公开了一种基于磁性共价有机框架和适配体修饰的金纳米粒子的鼠伤寒沙门氏菌的检测方法，属于食品安全技术领域。该检测方法以磁性共价有机框架作为捕获探针，捕获检测体系中存在的鼠伤寒沙门氏菌，孵育后磁分离收集磁性共价有机框架‑鼠伤寒沙门氏菌复合物；然后向其中加入适配体修饰的金纳米粒子，孵育后磁分离收集磁性共价有机框架‑鼠伤寒沙门氏菌复合物与适配体修饰的金纳米粒子形成的复合物，最后加入TPE‑4A/过氧化氢底物溶液，测定吸光度和/或荧光强度，智能手机提取颜色参数。该方法操作简单、灵敏度高、特异性强，三种检测模式协同自检，结果准确可靠。

技术领域

本发明属于食品安全技术领域，尤其涉及一种基于磁性共价有机框架和适配体修饰的金纳米粒子的鼠伤寒沙门氏菌的检测方法。

背景技术

鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)是一种常见的食源性病原体，在自然界中广泛分布，可通过食用受污染的肉、蛋、奶及其他相关制品引起人类胃肠道感染，出现发烧、恶心、呕吐、腹泻和腹部痉挛等症状，甚至引发菌血症，危及生命。该病在世界范围内广泛分布，可引起暴发性食物中毒，致死率高，因此，快速准确地检测食品中鼠伤寒沙门氏菌的污染水平具有重要的公共卫生意义。传统的检测方法如培养法、免疫学检测方法和以分子生物学为基础的检测方法等各自存在不足之处，例如检测周期长、检测成本高、对大型设备和人员素质要求高，因此在实际应用中受到限制。

随着各种新型材料的发展，纳米材料已成为食品安全领域应用最广泛的工具之一，在检测食源性致病菌方面具有巨大的潜力。共价有机框架(COFs)是一种新兴的由有机结构单元构成结晶多孔材料，COFs具有孔隙有序、表面积大、稳定性高等优点，被广泛应用天然酶、纳米酶等分子的载体，在催化、传感等方面表现出良好的性能。纳米酶是一类遵循酶动力学催化酶底物转化为产物的纳米材料，具有催化活性高、反应条件温和、稳定性好、易于大规模生产等优点。

发明内容

本发明提供了一种基于磁性共价有机框架和适配体修饰的金纳米粒子的鼠伤寒沙门氏菌的检测方法，其特征在于，所述检测方法以磁性共价有机框架作为捕获探针，捕获检测体系中存在的鼠伤寒沙门氏菌，孵育后磁分离收集磁性共价有机框架-鼠伤寒沙门氏菌复合物；然后向其中加入适配体修饰的金纳米粒子，孵育后磁分离收集磁性共价有机框架-鼠伤寒沙门氏菌复合物与适配体修饰的金纳米粒子形成的复合物，最后加入TPE-4A/过氧化氢底物溶液，测定吸光度和/或荧光强度。

优选地，所述磁性共价有机框架的制备方法包括以下步骤：

(1)称取1.2-1.5g六水合三氯化铁和3-4g无水乙酸钠，充分溶解于30-50mL乙二醇中，将溶液加热至180-220℃，反应14-18小时，冷却至室温后，磁铁磁分离黑色产物，分别用去离子水和无水乙醇洗涤，真空干燥后获得Fe₃O₄磁性纳米粒子粉末；

(2)称取0.07-0.09g 2,5-二甲氨基苯-1,4-二甲醛和0.1-0.11g 1,3,5-三(4-氨苯基)苯，溶解于30-50mL 1,4-二氧六环和正丁醇的混合溶液中；取0.1-0.15g Fe₃O₄磁性纳米粒子粉末超声后分散于上述混合溶液中，缓慢加入400-600μL冰乙酸后，室温下混悬反应2小时，然后取4-5mL乙酸溶液加入混合溶液，60-80℃水浴，避光反应45-50小时；冷却至室温后，磁铁磁分离黄绿色产物，分别用丙酮和四氢呋喃洗涤，真空干燥后即得到磁性共价有机框架。

更优选地，所述步骤(1)中六水合三氯化铁为1.35g，无水乙酸钠为3.6g，乙二醇为40mL。

更优选地，所述步骤(1)中将溶液加热至200℃，反应16小时。

更优选地，所述步骤(2)中1,4-二氧六环和正丁醇的体积比＝1:1。

更优选地，所述步骤(2)中乙酸溶液的浓度为12M。