[发明专利]一种固定化蛋白酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种固定化蛋白酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将壳聚糖和乙酸与CaCl₂混合，得含有氯化钙的壳聚糖溶液；

(2)将海藻酸钠逐滴滴加到含有氯化钙的壳聚糖溶液中，搅拌，形成2-3mm的光滑小球后硬化，清洗并干燥，得微球；

(3)将所述微球与戊二醛共价结合，将共价结合后的微球与中性蛋白酶振荡固定，清洗并干燥，得固定化蛋白酶。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤(1)中，将100KDa壳聚糖按照质量比1-3％溶于1-5％的乙酸溶液中，再添加终浓度为1-3％的CaCl₂。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤(2)中，将质量浓度为1-3％的海藻酸钠溶液逐滴滴入含有氯化钙的壳聚糖溶液中，置于磁力搅拌器按照20r/min转速搅拌。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤(2)所述清洗并干燥，包括将光滑小球置于4℃下硬化1h，用去离子水清洗去除凝胶表面的离子，抽滤除去表面水分后用滤纸吸干水分，置4℃备用。

5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将所述微球按照1:10的质量比添加1-5％的戊二醛5-30℃共价结合过夜，用去离子水清洗去除凝胶表面的离子，抽滤除去表面水分后用滤纸吸干水分，置于4℃备用。

6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将共价结合后的微球按照1:10的质量比添加中性蛋白酶液体10-40℃振荡过夜，用去离子水清洗去除凝胶表面的离子，抽滤除去表面水分后用滤纸吸干水分。

7.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述中性蛋白酶包括JW-3蛋白酶。

8.利用权利要求1～7任一项所述制备方法制备得到的固定化蛋白酶。

9.权利要求8所述固定化蛋白酶在脱毛中的应用。