[发明专利]一种癌胚抗原荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法

说明书

本申请提供一种癌胚抗原荧光免疫层析法测定试剂盒，以癌胚抗原单克隆抗体和鸡IgY抗体分别作为检测线和质控线上包被用抗体，癌胚抗原抗体和羊抗鸡IgY混合作为荧光微球标记抗体，采用的荧光免疫层析法，与目前常见的检测癌胚抗原的方法如，酶联免疫法/免疫增强比浊法/胶体金法相比，不仅大大缩短了检测时间、降低检测成本，还提高了检测灵敏度，与同类方法比较，具有标记过程简单、灵敏度高、结果准确且稳定等优点。

技术领域

本发明属于体外诊断免疫层析检测领域，尤其是涉及一种癌胚抗原荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法，具体地说是一种利用荧光免疫层析的技术原理实现定量检测人血清、血浆以及全血样本中癌胚抗原。

背景技术

癌胚抗原(CEA)是常见的恶性肿瘤相关抗原之一，是人类胚胎抗原特异性的酸性蛋白，具有调控细胞黏附作用。CEA异常表达上调是大肠癌、乳腺癌、胃癌和肺癌等许多恶性肿瘤的共同特征，因此对恶性肿瘤早期诊断、术前决策、指导治疗及复发转移判断有重要的临床应用价值。

临床检验中癌胚抗原的检测多以生化免疫比浊法酶联免疫吸附法等。由于酶联免疫吸附法检测耗时且操作复杂，已经不能满足大型医院快速定量检测的要求，该方法适合于批量检测但需要大型仪器，而免疫层析法由于检测快速且不需要大型仪器，在临床检验中占据一席之地。目前癌胚抗原免疫层析试剂也有胶体金法，检测快速但灵敏度不够、线性窄、特异性较差，无法精确的监测血液中的癌胚抗原含量的变化。

因此，亟需一种特异性高、灵敏度强的癌胚抗原试剂盒及其制备方法来解决上述问题。

发明内容

本发明为了解决现有技术灵敏度不够、线性窄、特异性较差，无法精确的监测血液中的癌胚抗原含量的变化的技术问题，提供一种特异性高、灵敏度强、标记过程简单、结果准确且稳定的癌胚抗原荧光免疫层析检测试剂盒。

本发明的第二个目的是提供癌胚抗原荧光免疫层析检测试剂盒的制备方法。

为实现上述第一个目的，本发明采用的技术方案是：

一种癌胚抗原荧光免疫层析检测试剂盒，包括试剂卡和稀释液，所述试剂卡包括PVC板以及依次设于所述PVC板上的样本垫、结合垫、NC膜和吸水纸，所述NC膜上设有检测线和质控线，所述结合垫中含有荧光微球标记的癌胚抗原抗体和荧光微球标记的羊抗鸡IgY抗体；

所述检测线上包被有癌胚抗原单克隆抗体，包被浓度为0.8-1.2mg/ml；

所述质控线上包被有鸡IgY抗体，包被浓度为0.8-1.2mg/ml。

优选的，所述标记用的荧光微球为南京微测生物科技有限公司粒径为300nm的Eu-荧光微球。

优选的，癌胚抗原标记抗体的标记量为10μg，羊抗鸡IgY标记抗体标记量为16μg。

优选的，标记抗体溶液喷量为3-5μL/cm；

包被工作液喷量为0.8-1.2μL/cm。

优选的，所述结合垫上荧光微球标记的癌胚抗原抗体中，荧光微球与癌胚抗原抗体的投料比为20:1；

所述结合垫上荧光微球标记的羊抗鸡IgY抗体中，荧光微球与羊抗鸡IgY抗体的投料比为25:2。

优选的，荧光微球标记癌胚抗原标记抗体，步骤如下：

a.取2mL离心管加入标记缓冲液MES 1mL，取混匀固含量为1％的荧光微球20μL于标记缓冲液中，再次涡旋混匀；

b.加入标记活化液100μL混匀，旋转混匀反应30min；

c.进行离心30min，离心转速为10000rpm/min，弃去上清液，加入标记缓冲液1000μL，超声；