[发明专利]一种多功能诊疗一体化核壳树状分子纳米平台及其制备方法

权利要求书

1.一种多功能诊疗一体化核壳树状分子纳米平台，其特征在于：所述纳米平台包括螯合钆离子和修饰两性离子的核壳树状分子PCSTD-Gd以及化疗药物阿霉素DOX和microRNA21基因抑制剂miR 21i。

2.根据权利要求1所述的纳米平台，其特征在于：所述PCSTD-Gd和DOX的摩尔比为1:10～1:20；所述PCSTD-Gd和miR 21i的N/P比为0.125:1～30:1。

3.一种多功能诊疗一体化核壳树状分子纳米平台的制备方法，包括如下步骤：

(1)将第三代聚酰胺-胺树状大分子溶于二甲基亚砜DMSO中，然后在磁力搅拌条件下，逐滴加入同样溶于DMSO中的羟基琥珀酰亚胺-四氮杂环十二烷四乙酸酯DOTA-NHS进行反应，透析、冻干处理，得到G3-DOTA；

(2)将金刚烷乙酸Ad-COOH分散在DMSO中，然后在磁力搅拌条件下，逐滴加入1-(3-二甲基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC·HCl和N-羟基丁二酰亚胺NHS的DMSO溶液活化，将活化的Ad-COOH溶液缓慢加入到G3-DOTA溶液中反应，透析、冻干处理，得到Ad-G3-DOTA；

(3)将β-环糊精β-CD分散在DMSO中，逐滴加入羰基咪唑CDI的DMSO溶液活化，将活化的β-CD溶液加入到G5.NH₂溶液中，继续反应，透析、冻干处理，得到G5-CD；

(4)将步骤(2)中Ad-G3-DOTA和步骤(3)中G5-CD分别用超纯水溶解后混合，反应，透析、冻干处理，得到G5-CD/Ad-G3-DOTA核壳树状分子，即CSTD；

(5)将步骤(4)中CSTD溶于超纯水中，然后将两性离子1,3-丙烷磺内酯1,3-PS逐滴加入到CSTD溶液中，反应，透析、冻干处理，得到1,3-PS-CSTD，即PCSTD；

(6)将步骤(5)中PCSTD和硝酸钆Gd(NO₃)₃·6H₂O分别用超纯水溶解后混合，反应，透析、冻干处理，得到PCSTD-Gd；

(7)将步骤(6)中PCSTD-Gd溶于超纯水中，与甲醇溶解的去质子化的DOX·HCl溶液混合，敞口反应，离心处理，取上清液进行冻干处理，得到PCSTD-Gd/DOX复合物；

(8)将步骤(7)中PCSTD-Gd/DOX与miR 21i进行孵育，得到PCSTD-Gd/DOX/miR 21i复合物。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中G3.NH₂和DOTA-NHS的摩尔比为1:3～6；反应温度为室温，反应时间为24～30h。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中Ad-COOH、EDC·HCl、NHS和G3-DOTA的摩尔比为1～2:20:20:1；活化温度为室温，活化时间为2～4h；反应温度为室温，反应时间为2～4d。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中β-CD、CDI和G5.NH₂的摩尔比为25～30:250～300:1；活化温度为室温，活化时间为4～6h；反应温度为室温，反应时间为48～60h。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中Ad-G3-DOTA与G5-CD的摩尔比为1:12～15；反应温度为室温，反应时间为48～60h。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中1,3-PS与CSTD的摩尔比为1:90～100；反应温度为室温，反应时间为24-30h。

9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中PCSTD与Gd(NO₃)₃·6H₂O的摩尔比为1:60～70；反应温度为室温，反应时间为24-30h。

10.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(7)中PCSTD-Gd核壳树状分子与DOX的摩尔比为1:10～20；敞口反应为避光敞口室温搅拌过夜，反应结束后离心的转速为7500～8500r/min，离心时间为8～20min；所述步骤(8)中PCSTD-Gd/DOX与miR 21i的孵育为：将PCSTD-Gd/DOX和miR 21i分别用焦碳酸二乙酯DEPC水溶解，然后按照不同的氮磷比将两种溶液混合均匀后于室温孵育20～30min。