[发明专利]暗纹东方鲀L-型凝集素VIP36及其编码基因与应用

说明书

本发明公开了暗纹东方鲀L‑型凝集素VIP36，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码基因如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了暗纹东方鲀L‑型凝集素VIP36在制备具有抑制金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、哈氏弧菌功效的制剂中的应用。本发明首次克隆获得了暗纹东方鲀L‑型凝集素VIP36的编码基因，构建了暗纹东方鲀L‑型凝集素VIP36的原核表达载体并研制了重组蛋白；研究了VIP36重组蛋白在暗纹东方鲀免疫防御功能中的用途，免疫防御功能包括调节先天免疫维护机体的稳态与健康，本发明为预防病原菌引起的疾病提供了理论基础，也为暗纹东方鲀的健康养殖提供了理论指导。

技术领域

本发明涉及暗纹东方鲀L-型凝集素VIP36及其编码基因与应用，属于凝集素的活性研究技术领域。

背景技术

暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)，习称河鲀，隶属于硬骨鱼纲，东方鲀属，主要分布在中国近海和长江中下游，是一种典型的江海洄游性鱼类。河鲀肉质鲜美、药用价值高，具有重要的经济价值。然而，随着养殖规模的不断扩大，水体环境的逐渐恶化，养殖疾病如细菌性鱼病等频繁发生。河鲀属于先天性免疫与获得性免疫并存的低等脊椎动物，其获得性免疫较不完备，先天性免疫系统在河鲀应对外界病原微生物侵袭的防御反应中起着至关重要的作用。因而河鲀免疫相关基因的开发和利用尤显重要。

L-型凝集素(L-type Lectins，LTL)最先发现于豆科植物的种子中，它含有糖类识别结构域(Lectin_leg-like domain，LTLD)。目前已在植物中分离得到100多种LTLs，其糖类结合活性各有不同，但却有着相似的物理化学性质及结构。在动物中也发现了包含LTLD的蛋白，这些蛋白大多属于膜结合蛋白，区别于植物中所发现的可溶性LTL。在高等哺乳动物中，目前已发现了四种L-型凝集素：内质网-高尔基体中间室-53KDa蛋白ERGIC-53、ERGIC-53样蛋白、36KDa的膜泡整合膜蛋白VIP36和VIP36样蛋白。这些凝集素属于L-型膜蛋白，含有一个胞外LTLD结构域和一个细胞溶质结构域。L-型凝集素参与了动物蛋白的分选和运输。ERGIC-53和VIP36是最先发现的动物L-型凝集素。在Ca²⁺的存在下，ERGIC-53能够识别富含甘露糖的蛋白质，促进某些糖蛋白从内质网运输到高尔基体。VIP36同样参与了蛋白分泌过程中的运输。近年来，许多研究发现植物L-型凝集素受体激酶参与了植物抗病原微生物的免疫应答，而关于动物L-型凝集素的研究仍处于摸索阶段。有研究报道斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus L-型凝集素ERGIC-53、VIP36和VIP36-like，参与了抵御革兰氏阴性菌爱德华氏菌Edwardsiella ictaluri入侵的免疫反应；在日本囊对虾Marsupenaeusjaponicas中，L-型凝集素作为一种调理素参与对虾抗菌免疫。

目前尚未见到关于暗纹东方鲀L-型凝集素及其免疫功能的相关报道。研究L-型凝集素基因及其相关免疫功能对进一步阐明河鲀的固有免疫系统调控机制、掌握L-型凝集素基因对河鲀免疫代谢的影响具有重要意义，同时，也可为预防病原菌引起的疾病提供理论基础，也为揭示河鲀健康养殖提供理论指导。

发明内容

针对上述现有技术，本发明通过RACE技术克隆获得了暗纹东方鲀L-型凝集素VIP36基因的开放阅读框序列(序列全长为1002bp，编码333个氨基酸)及暗纹东方鲀L-型凝集素VIP36；并研究了暗纹东方鲀L-型凝集素VIP36在宿主抗细菌先天免疫防御中的作用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

暗纹东方鲀L-型凝集素VIP36，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

暗纹东方鲀L-型凝集素VIP36在制备具有抑制金黄色葡萄球菌功效的制剂中的应用。

暗纹东方鲀L-型凝集素VIP36在制备具有抑制副溶血弧菌功效的制剂中的应用。