[发明专利]基因敲除突变体斑马鱼在制备色素减少动物模型中的应用

权利要求书

1.基因敲除突变体斑马鱼在制备色素减少动物模型中的应用，其特征在于；包括突变体斑马鱼，突变体斑马鱼为针对krt5基因第1个外显子中第69位至103位突变11个碱基的斑马鱼。

2.根据权利要求1所述的基因敲除突变体斑马鱼在制备色素减少动物模型中的应用，其特征在于：色素减少动物模型为krt5基因突变体斑马鱼，且该突变体斑马鱼表现症状为：

黑色素细胞数量减少；

黑色素细胞面积降低；

黑色素细胞突触受到抑制，细胞形态变圆。

3.根据权利要求2所述的基因敲除突变体斑马鱼在制备色素减少动物模型中的应用，其特征在于：所述色素减少动物模型由krt5基因异常表达引起的。

4.根据权利要求3所述的基因敲除突变体斑马鱼在制备色素减少动物模型中的应用，其特征在于：色素减少症状在通过使用促进黑素沉着类型药物治疗后症状缓解。

5.根据权利要求3所述的基因敲除突变体斑马鱼在制备色素减少动物模型中的应用，其特征在于：所述黑素沉着类型药物包括补骨脂、UVB、JAK抑制剂等。

6.根据权利要求1所述的基因敲除突变体斑马鱼的制备方法，其特征在于：所述krt5基因敲除突变体斑马鱼通过如下方法制备得到:

步骤S1：设计和构建krt5基因靶位点的sgRNA；

步骤S2：将有活性的sgRNA和Cas9 mRNA共注射到1细胞期斑马鱼胚胎动物极，随机选取5～20枚胚胎，确认Founder胚胎细胞携带目标基因突变的等位基因；

步骤S3：将注射后的胚胎进行培养，得到krt5基因敲除斑马鱼突变体。

7.根据权利要求6所述的基因敲除突变体斑马鱼在制备色素减少动物模型中的应用，其特征在于：步骤S1中，运用CRISPR Cas9技术在krt5基因第一个外显子的前100个碱基设计krt5基因靶位点的sgRNA，然后合成sgRNA。

8.根据权利要求6所述的基因敲除突变体斑马鱼在制备色素减少动物模型中的应用，其特征在于：步骤S3中，将注射后的胚胎进行培养，得到krt5基因敲除斑马鱼突变体F₀；

将krt5基因敲除斑马鱼突变体F₀与野生型斑马鱼侧交，获取稳定遗传的krt5基因敲除斑马鱼突变体F₁代杂合子；

krt5基因敲除斑马鱼突变体F₁代杂合子自交，获取krt5基因敲除斑马鱼突变体F2代杂合子krt5^+/-和纯合子krt5^-/-。

9.根据权利要求1所述的基因敲除突变体斑马鱼在制备色素减少动物模型中的应用，其特征在于：所述突变体斑马鱼应用于黑素研究模型。