[发明专利]一种从黑果小檗果实中分离纯化锦葵素-3-O-葡萄糖苷的方法

说明书

本发明公开了一种从黑果小檗果实中分离纯化锦葵素‑3‑O‑葡萄糖苷的方法，属于天然产物的分离纯化技术领域。本发明首先从黑果小檗果实中提取花色苷粗提物，然后将花色苷粗提物通过大孔树脂以及聚酰胺树脂，洗脱、浓缩，进行纯化，最后经过Sephadex LH‑20凝胶柱分离，得到锦葵素‑3‑O‑葡萄糖苷样品。本发明的纯化、分离工艺简单，能有效分离得到高纯度花色苷单体，为大规模的工业化生产打下基础。

技术领域

本发明涉及天然产物的分离纯化技术领域，特别是涉及一种从黑果小檗果实中分离纯化锦葵素-3-O-葡萄糖苷的方法。

背景技术

花色苷(Anthocyanin)是一种广泛存在于自然界中的水溶性天然植物色素，是由花青素与一个或多个糖基，通过糖苷键结合形成的多酚类化合物。广泛存在于植物的花、果实、茎、叶和根器官的细胞液中，呈现出由红、紫红到兰等不同颜色。近年来，大量的研究证实天然来源的花色苷具有抗氧化、抗肿瘤、降血脂、改善胰岛素抵抗、防治心血管系统疾病和保护视力等多种生物活性。锦葵素-3-O-葡萄糖苷(Malvidin-3-O-glucoside,Mal-3G)是花色苷中具有代表性的化合物之一，具有优良的生物活性。已有研究表明，Mal-3G具有抗氧化、改善酒精性脂肪肝等功效。因此，Mal-3G不仅可以作为天然色素用于食品加工，而且还可以作为天然抗氧化剂及功能食品因子用于保健食品的开发。

黑果小檗(Berheris heteropoda Schrenk)，别名刺黄檗，是小檗科小檗属灌木植物，具健胃和中、生津止渴、清热解毒等功效，是一种药食两用的植物。现有技术中已有通过从黑果小檗果实中提取花色苷的方法，如公开号为CN108567807A的发明专利公开了一种黑果小檗总花色苷提取及其纯化方法，具体是将黑果小檗果实粉碎后取浆液，超声提取，过滤，旋蒸得到总花色苷浓缩液，将总花色苷稀释液通过大孔树脂吸附后，向树脂中加入乙醇溶液洗脱后，洗脱液浓缩干燥后得到黑果小檗总花色苷提取物，并未实现花色苷单体的制备。

到目前为止分离纯化花色苷单体的方法一般都是用半制备高效液相色谱或高速逆流色谱法等，这些方法普遍存在设备昂贵、方法烦琐等缺点，且无法进行大规模的分离纯化，在实际生产中难以得到应用，使得花色苷产品大量缺乏，价格非常昂贵。因此，寻找一种提取率高、成本低和易于工业化生产的花色苷分离纯化工艺，可为黑果小檗中花色苷的特征生物活性研究奠定基础，为构效关系的研究提供前提。

发明内容

本发明的目的是提供一种从黑果小檗果实中分离纯化锦葵素-3-O-葡萄糖苷的方法，以解决现有技术中存在的问题，通过超声提取，大孔树脂以及聚酰胺纯化，SephadexLH-20凝胶柱分离，达到快速、简单获得锦葵素-3-O-葡萄糖苷(Mal-3G)单体的目的。本发明的分离纯化工艺简单易行，操作安全以及纯度高，同时适用于工业应用。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：一种从黑果小檗果实中分离纯化锦葵素-3-O-葡萄糖苷的方法，包括以下步骤：

(1)将黑果小檗(野生黑果小檗)粉末和乙醇酸性溶液混合后超声提取，提取液经萃取后得到花色苷粗提物；

(2)采用大孔吸附树脂对所述花色苷粗提物进行分离纯化，得到样品1；

(3)采用聚酰胺树脂对所述样品1进行分离纯化，得到样品2；

(4)将所述样品2采用Sephadex LH-20凝胶柱分离纯化，得到所述锦葵素-3-O-葡萄糖苷(Mal-3G样品)。

进一步地，步骤(1)中，所述黑果小檗粉末的粒径为20～50目；所述黑果小檗粉末和乙醇酸性溶液的质量/体积比为1g∶25mL；所述超声提取的次数为3～4次，每次提取的时间为20min；所述乙醇酸性溶液为乙醇、盐酸和水的混合溶液，混合溶液中乙醇的浓度为70vol.％、盐酸的浓度为0.8vol.％。