[发明专利]靶向沉默BUB1B基因的shRNA及其用途

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种靶向沉默BUB1B基因的shRNA及其用途；本发明设计并合成了针对BUB1B基因的shRNA分子，并设计出构建shRNA的寡核苷酸序列，该分子与BUB1B基因的mRNA结合，高效地干扰其转录后翻译，降低BUB1B基因在肺癌细胞中的表达，从而抑制肺癌细胞增殖和侵润。对于抗肿瘤的治疗具有十分重要的意义，将该shRNA分子进一步开发成为临床治疗药物，在未来抗肺癌的靶向基因药物研发中具有巨大的潜在价值，有望应用于制备高效、特异性强、副作用小的抗肿瘤药物。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种靶向沉默BUB1B基因的shRNA及其用途。

背景技术

BUB1B(BUB1有丝分裂检查点丝氨酸/苏氨酸激酶B)，属于纺锤体组装检查点(SAC)蛋白家族成员，能够通过防止姐妹染色单体的过早分离来保持基因组稳定性，直到所有着丝粒在有丝分裂过程中正确附着到纺锤体上。它在SAC信号转导和维持纺锤微管的稳定附着中起着重要作用。此外，BUB1B通过与其他SAC蛋白相互作用形成有丝分裂检查点复合物，并抑制泛素连接酶促进复合物/环体(APC/C)的活性，从而抑制有丝分裂后期的开始，APC/C是一种进化上保守的泛素连合酶复合物，会调节细胞周期蛋白的降解，从而确保染色体的适当分离。鉴于BUB1B在有丝分裂检查点信号传递和染色体聚合中的关键作用，BUB1B的异常表达或突变可能导致染色体非整倍体或不稳定，导致癌症发病率增加。

RNA干扰技术(RNAi)是物种在进化上的一种高度保守的基因防御机制，即一种依赖于双链RNA特异性短序列实现转录后的基因沉默的技术。目前实验室常用的RNAi技术主要有小干扰RNA(siRNA)与短发夹RNA(shRNA)等。siRNA是短的双链RNA，大小在19-29nt左右，3’端有两个游离的碱基，可激活RNA的干扰，通过与目标mRNA互补序列结合，特异性地实现mRNA降解。但是，siRNA在细胞中的表达是瞬时的，发挥作用的时间比较短。相对于siRNA，shRNA可以通过病毒介导的转染保持稳定，能够减少脱靶效应。

调节BUB1B基因的表达有利于研究BUB1B基因在癌症发病中的作用，但是目前没有关于shRNA干扰BUB1B基因表达情况及作用研究的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中存在的一些问题，提供一种靶向性沉默BUB1B基因的shRNA、重组表达载体及其应用。本发明根据沉默BUB1B基因对肺癌细胞生长和侵润的影响，判断沉默BUB1B基因的shRNA序列的特异性，验证可沉默BUB1B基因的shRNA序列对抗肺癌的作用。

为实现上述发明目的，本发明采取的技术方案如下：

本发明首先提供了一种shRNA，其能靶向沉默BUB1B基因表达，进一步的，所述shRNA包括shBUB1B-1或shBUB1B-2，用于沉默BUB1B基因的靶点序列；其中，所述shBUB1B-1的正反链分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述shBUB1B-2的正反链分别为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

本发明还提供了一种包含上述的靶向沉默BUB1B基因表达的shRNA序列的慢病毒表达载体，所述载体为pLKO.1-TRC-shBUB1B-1或pLKO.1-TRC-shBUB1B-2。所述慢病毒表达载体由所述shBUB1B-1或shBUB1B-2分别克隆到慢病毒表达载体PLKO.1-TRC中获得。

本发明还提供了包含所述的靶向沉默BUB1B基因表达的shRNA或包含所述的慢病毒表达载体的重组细胞。

本发明还提供所述的靶向沉默BUB1B基因表达的shRNA、或所述的慢病毒表达载体、或所述的重组细胞在制备抑制BUB1B基因表达的产品方面的应用。

本发明还提供所述的靶向沉默BUB1B基因表达的shRNA、或所述的慢病毒表达载体、或所述的重组细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。