[发明专利]一种ABO基因扩增引物、扩增体系、扩增方法、测序文库构建方法及测序方法

权利要求书

1.一种ABO基因引物，其特征在于，其引物序列包括：

引物1：ABO-1-F，核苷酸序列为：

ACATAGACAGTATCGGGGTTGCGCTG

引物2：ABO-1-R，核苷酸序列为：

GAGGAGACAGCAATTCCAATCTTACAGAG

引物3：ABO-2-F，核苷酸序列为：

CTCCGCAGTCATTCCCCATTCCCAC

引物4：ABO-2-R，核苷酸序列为：

TCCCTGCTGTCTCAGAGGCTCATGTT

引物5：ABO-3-F，核苷酸序列为：

CCCTACAGCCAAACGATCTACCAACTAC

引物6：ABO-3-R，核苷酸序列为：

TGCGGGAAGAGTCACTCCAGTCC。

2.一种ABO基因扩增引物，其特征在于，包括：第一组基因引物混合和第二组基因引物混合；

所述第一组基因引物混合包括：

第一组引物：ABO-1-F和ABO-1-R；

第二组引物：ABO-3-F和ABO-3-R；

所述第二组基因引物混合包括：

引物：ABO-2-F和ABO-2-R。

3.根据权利要求2所述的ABO基因扩增引物，其特征在于，各引物组中的引物配比为：

ABO-1-F和ABO-1-R为0.08μL:0.08μL；

ABO-3-F和ABO-3-R为0.08μL:0.08μL；

ABO-2-F和ABO-2-R为0.05μL:0.05μL。

4.一种ABO基因扩增体系，将权利要求2所述的第一组基因引物混合以及第二组基因引物混合分别稀释至工作浓度并按照预定配比配制，其特征在于，ABO基因扩增体系包括：第一扩增体系与第二扩增体系；

所述第一扩增体系包括：

12.5μL的KOD Neo FX Buffer、5μL的dNTPs、0.32μL的第一组基因引物混合、5μL的gDNA(10ng/μL)、0.5μL的KOD Neo FX、1.68μL的warter；所述第一扩增体系的总体积为25μL；

所述第二扩增体系包括：

12.5μL的KOD Neo FX Buffer、5μL的dNTPs、0.1μL的第二组基因引物混合、5μL的gDNA(10ng/μL)、0.5μL的KOD Neo FX、1.9μL的warter；所述第二扩增体系的总体积为25μL。

5.根据权利要求4所述的ABO基因扩增体系，其特征在于，按照预定配比配制过程中，分别将第一扩增体系与第二扩增体系置于两个管中，分别对两个管进行扣盖混匀离心处理。

6.一种扩增方法，用于分别对权利要求4或5所述的第一扩增体系、第二扩增体系进行扩增，其特征在于，包括：

对所述第一扩增体系进行扩增，得到扩增产物；其中，扩增的工作参数为：94℃，2min；98℃，12s，68℃，12min，26个循环，第11个循环开始，每循环增加30s；68℃，10min；

对所述第二扩增体系进行扩增，得到扩增产物；其中，扩增的工作参数为：94℃，2min；98℃，12s，68℃，12min，26个循环，第11个循环开始，每循环增加30s；68℃，10min。

7.根据权利要求6所述的扩增方法，其特征在于，分别对所述第一扩增体系以及所述第二扩增体系扩增后，所述方法还包括：

利用1％琼脂糖凝胶电泳对PCR反应后产物进行检测分析，得到扩增产物中目的基因是否扩增的检测结果；其中，检测电压：120V；检测时间：120min。