[发明专利]一种tRF-1:28-Glu-CTC-1-M2及其应用

说明书

本发明提供了一种tRF‑1:28‑Glu‑CTC‑1‑M2及其应用。不仅提供了一种新的tRF，还发现检测tRF‑1:28‑Glu‑CTC‑1‑M2的实时荧光定量分析法可以用于辅助诊断鼻咽癌。已经通过研究证实tRF‑1:28‑Glu‑CTC‑1‑M2在鼻咽癌中表达上调。还通过抑制该tRF发现具有治疗鼻咽癌的潜力，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及一种新的tRF分子及其在制备肿瘤诊断和治疗制剂中的应用。

背景技术

tsRNAs是一类从tRNA酶切产生的新型小非编码RNA，根据tsRNA在tRNA来源位置及长度的不同，可以分为两大类:tiRNA和tRF。其中，tiRNA，也称为tRNA haves，长度约30-40nt，包括tiRNA-3和tiRNA-5，由ANG负责切割成熟tRNA的反密码子环产生。tRF来源于成熟或前体tRNA，长度为14-40nt，根据其起源位置又可分为tRF-1、tRF-2、tRF-3、tRF-5。其中tRF-1是RNaseZ/ELAC2裂解pre-tRNA的3'端尾序列产生，不包含在成熟tRNA序列中，其序列保守性差，长度可变性大。tRF-3由Dicer,ANG等酶切割成熟tRNA TΨC环的3'端产生，它们通常包含CCA尾，根据长度可分为tRF-3a(17-18nt)和tRF-3b(19-22nt)。tRF-5在成熟tRNA的D-loop或茎区以Dicer依赖的方式裂解，产生不同长度的片段:tRF-5a(14-16nt)、tRF-5b(22-24nt)或tRF-5c(28-32nt)。早期被认为是tRNA随机降解的产物。随着深度测序技术的发展，生物信息学分析技术的提高，跨物种以及大样本研究为tRF的重要性及其功能多样性提供了强有力的证据。研究发现tRF广泛参与基因沉默、核糖体发生、翻译效率、细胞周期和表观遗传调控，在生命活动中发挥至关重要的作用。同时，tsRNA在包括肿瘤在内的人类多种疾病中扮演重要角色，大量研究显示，tsRNA可在多个水平调控肿瘤的发生、发展，并可作为肿瘤诊断和预后的生物标记、及治疗的靶标。

发明内容

本发明通过鼻咽癌RNA-seq测序数据GSE159746中分析发现一个tRF分子显著上调，该分子来源tRNA：tRNA-Glu-CTC，命名为tRF-1:28-Glu-CTC-1-M2，MINTbase_ID：tRF-28-87R8WP9N1E0K，序列为TCCCTGGTGGTCTAGTGGTTAGGATTCG，分子长度为28nt。

本发明的首要目的是提供一种新的tRF-1:28-Glu-CTC-1-M2，序列为：TCCCTGGTGGTCTAGTGGTTAGGATTCG。为鼻咽癌诊断或者治疗提供新的工具。

本发明的第二个目的是提供一种检测tRF-1:28-Glu-CTC-1-M2的试剂在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用，所述的tRF-1:28-Glu-CTC-1-M2序列为：TCCCTGGTGGTCTAGTGGTTAGGATTCG。

本发明通过试验发现在正常鼻咽上皮组织和鼻咽癌组织进行实时荧光定量PCR检测表达，结果表明tRF-1:28-Glu-CTC-1-M2分子在鼻咽癌组织中表达上调。这为鼻咽癌诊断提供了新的可靠的检测途径。

进一步地，所述的检测tRF-1:28-Glu-CTC-1-M2的试剂包括逆转录引物和PCR引物。

逆转录引物为：

GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCGAATC，PCR引物为：

上游引物：TCCCTGGTGGTCTAGTGGTT

下游引物：GTGCAGGGTCCGAGGT。

本发明的逆转录引物和PCR引物包括但不限于上述序列。