[发明专利]一种隐球菌的鉴定方法、引物对及试剂盒

权利要求书

1.一种隐球菌的鉴定方法，其特征在于，所述方法包括：

获取待测样本的基因组DNA；

通过聚合酶链式反应PCR对所述基因组DNA的URA5基因和/或SOD1基因进行扩增以获取扩增产物；

对所述扩增产物进行sanger测序；

根据所述URA5基因和/或所述SOD1基因的测序结果确定所述隐球菌的类型。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述隐球菌的类型包括VGIc型隐球菌、VGId型隐球菌以及野生型隐球菌。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述URA5基因和/或所述SOD1基因的测序结果包括：

所述URA5基因和/或所述SOD1基因位点的序列。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述位点包括所述URA5基因的353位点、所述SOD1基因的54位点或所述SOD1基因的457位点中的至少一个。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述确定所述隐球菌的类型包括：

在所述URA5基因的353位点为鸟嘌呤G的情况下，确定所述隐球菌为VGIc型隐球菌。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述确定所述隐球菌的类型包括：

在所述SOD1基因的54位点为胸腺嘧啶T，且所述SOD1基因的457位点为胞嘧啶C的情况下，确定所述隐球菌为VGId型隐球菌。

7.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述确定所述隐球菌的类型包括：

在所述URA5基因的353位点为腺嘌呤A、胞嘧啶C或胸腺嘧啶T的情况下；或

在所述SOD1基因的54位点为腺嘌呤A、胞嘧啶C或鸟嘌呤G的情况下；或

在所述SOD1基因的457位点为腺嘌呤A、胸腺嘧啶T或鸟嘌呤G的情况下，确定所述隐球菌为野生型隐球菌。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述PCR反应物包括：URA5正向引物与URA5反向引物，和/或SOD1正向引物与SOD1反向引物；其中，所述URA5正向引物的核苷酸序列如Seq ID No.1所示，所述URA5反向引物的核苷酸序列如Seq ID No.2所示，所述SOD1正向引物的核苷酸序列如Seq ID No.3所示，所述SOD1反向引物为的核苷酸序列如SeqID No.4所示。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，在获取所述扩增产物后，所述方法还包括：

确认所述URA5基因和/或所述SOD1基因扩增成功。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，通过凝胶电泳法确认所述URA5基因和/或所述SOD1基因扩增成功。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其特征在于，所述获取待测样本的基因组DNA包括：

通过液氮研磨法研磨所述待测样本；

通过标准酚氯仿法提取所述基因组DNA。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其特征在于，所述待测样本包括血液和/或体液。

13.一种鉴定隐球菌的引物对，其特征在于，所述引物对包括第一引物对和/或第二引物对，其中第一引物对包括第一正向引物和第一反向引物，第二引物对包括第二正向引物和第二反向引物，所述第一正向引物的核苷酸序列如Seq ID No.1所示，所述第一反向引物的核苷酸序列如Seq ID No.2所示，所述第二正向引物的核苷酸序列如Seq ID No.3所示，所述第二反向引物的核苷酸序列如Seq ID No.4所示。