[发明专利]一种用于鉴别诊断猫疱疹病毒、猫杯状病毒、支气管败血波氏杆菌的引物组合物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴别诊断猫疱疹病毒、猫杯状病毒、支气管败血波氏杆菌的引物组合物及其应用，属于生物技术领域。包括以下引物：外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，环引物LF和LB。本发明可用于鉴别诊断引起猫呼吸道疾病的猫疱疹病毒病原基因、猫杯状病毒病原基因、支气管败血波氏杆菌病原基因。本发明提供的引物组合物检测引起猫呼吸道疾病的病原基因。具有灵敏度好、特异性高、用时短、稳定性高等特点。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，具体涉及一种用于鉴别诊断猫疱疹病毒、猫杯状病毒、支气管败血波氏杆菌的引物组合物及其应用。

背景技术

猫呼吸道病原感染严重危害宠物健康与生活质量，是宠物疾病中发病率最高的症状之一，且常因多种呼吸道病原病毒混合感染而使病情加重。引起猫呼吸道疾病的病原主要包括猫疱疹病毒、猫杯状病毒、支气管败血波氏杆菌。

猫疱疹病毒(Feline herpesvirus，FHV-1)具有糖蛋白-脂质包膜的双链DNA病毒，具有高度接触性传染，是呼吸道疾病中最常见，也最严重的一种。病毒经由口鼻、结膜等途径进入猫的身体，进而引发鼻黏膜上皮细胞的裂解性感染，并借此传播至结膜、咽喉、气管、支气管及小支气管，病灶为局部多发性坏死性(嗜中性粒细胞浸润)及发炎性病灶，曾有报道指出可能会发生短暂的病毒血症，特别是新生儿或低体温的幼猫，因为猫疱疹病毒喜欢在较低温度状况下进行复制。于感染24h之后开始排放病毒，并持续1-3周，急性发病会在10-14d内得到缓解，有些则会形成上呼吸道及眼睛的慢性病灶。常规采用PCR来检测病毒，耗时较长。

猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)感染是猫的一种多发性口腔和呼吸道传染病，又称为猫传染性鼻结膜炎。发病率较高，在小于84日龄的猫常可致死。传染源主要是病猫及带毒猫。前者在急性期可随分泌物、排泄物排出大量病毒；后者一般由急性病例转变而来，虽临床症状消失，但可长期排毒。感染后的潜伏期为2～3天，病初精神不振，发热至39.5～40.5℃。精神欠佳、打喷嚏，口腔及鼻腔分泌物增多，流涎，眼鼻分泌物开始为浆液性、4～5天后为脓性，出现角膜发炎、羞明等症状。随后，口腔出现溃疡，溃疡面分布于舌和硬腭部，尤其是脖中裂部最常见。发生口腔溃疡的猫咪，因口腔不适而吞咽吃食困难，流口水，有明显的吞咽动作。严重病例会出现支气管炎甚至肺炎，而致呼吸困难，肺部有干性或湿性罗音，可因肺炎致死。目前病原诊断方法包括中和试验，琼脂扩散试验，荧光抗体技术或补体结合试验等，耗时长、实验条件与检测费用高。

支气管败血波氏杆菌(Bordetellabronchiseptica,Bb)为革兰阴性细小球菌，具鞭毛而能运动，极好氧，感染症状分为鼻炎型、支气管肺炎型和败血型。其中以鼻炎型较为常见，患病犬猫鼻腔流出浆液性或黏液脓性分泌物。支气管肺炎型多呈散发，患病犬猫有时鼻腔流出白色黏液脓性分泌物，发病后期呼吸困难，呈犬坐姿势，食欲不振，消瘦而死。败血型为病菌侵入血液引起败血症，若不治疗很快死亡。本病菌常存在于猫上呼吸道黏膜上。对于猫，这是一种在猫呼吸道中的常在菌，当猫因为心情、环境、先天等免疫下降或其他呼吸道感染而继发的各种条件下，就会感染此病菌，并有机会向外传播。本病也常继发于猫杯状病毒和猫疱疹病毒感染

猫呼吸道传染病的临床表现非常相似，不易区别。目前的病原分离和鉴定是方法，耗时较长，对实验环境要求高，人工成本高。高通量LAMP微流控芯片检测病毒性腹泻病原效率更高，更便捷。

发明内容

本发明提供一种用于鉴别诊断引起猫呼吸道疾病的病原的引物组和物及其应用。具体通过以下技术方案实现：

所述用于检测猫疱疹病毒糖蛋白H基因的引物组合物，包括以下引物：

F3引物为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；

B3引物为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；

FIP引物为SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；