[发明专利]一种橘绿木霉发酵物粗提物的制备及其应用

权利要求书

1.一种橘绿木霉MB15抑制物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：橘绿木霉MB15的分离和纯化：从药用植物百两金根部分离得到橘绿木霉MB15，并用孟加拉红培养基进行纯化；

S2：橘绿木霉MB15的种子液培养：将橘绿木霉MB15挑于PDA综合培养基中培养3-5d，后用打孔器打取6mm的菌饼；配制PDB综合培养基，向锥形瓶内放置PDB综合培养基，每瓶PDB综合培养基放置3颗菌饼，于160r/min，28℃振荡培养3-5d，即为橘绿木霉MB15的种子液；

S3：橘绿木霉MB15的发酵：吸取S2中的种子液于新的PDB综合培养基中，于160r/min，28℃振荡培养7d；

S4：橘绿木霉MB15发酵液的萃取：将S3的发酵物中菌丝体与菌液分离，菌液与等量乙酸乙酯混合，冷浸超声60min/次，萃取3次；菌丝烘干，研磨成粉末状，将菌丝体溶于乙醇中，常温下超声60min/次，萃取3次，过滤后与菌液萃取液合并；

S5：橘绿木霉MB15的抑制物的浓缩：将S4合并的萃取液于40℃中旋转蒸发，得到粉末状固体，即为橘绿木霉MB15的抑制物。

2.根据权利要求1所述一种橘绿木霉MB15抑制物的制备方法，其特征在于，所述孟加拉红培养基配方为：蛋白胨5g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，葡萄糖10g，氯霉素0.1g，孟加拉红0.033g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。

3.根据权利要求1所述一种橘绿木霉MB15抑制物的制备方法，其特征在于，所述S2中锥形瓶容量与PDB综合培养基的容量比为2.5:1。

4.根据权利要求1所述一种橘绿木霉MB15抑制物的制备方法，其特征在于，所述PDB综合培养基配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，胰蛋白胨5g，酵母粉5g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，蒸馏水1000mL，自然pH。

5.根据权利要求1所述一种橘绿木霉MB15抑制物的制备方法，其特征在于，所述PDA综合培养基配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，胰蛋白胨5g，酵母粉5g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，自然pH。

6.根据权利要求1所述一种橘绿木霉MB15抑制物的制备方法，其特征在于，所述S3中PDB综合培养基与种子液的容量比为50:1。

7.根据权利要求1所述一种橘绿木霉MB15抑制物的制备方法，其特征在于，所述S4中菌丝与乙醇的固液比为1:5；菌丝需现在50℃下烘干后研磨成粉状；乙醇浓度为70％。

8.根据权利要求1所述一种橘绿木霉MB15抑制物的制备方法，其特征在于，所述S5制备得到的橘绿木霉MB15的抑制物再用甲醇溶解洗脱，4℃保存。