[发明专利]一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法

权利要求书

1.一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法，其特征在于，先采用EDC和EDC交联反应基团将诱饵分子共价交联于聚苯乙烯微球上制成诱饵微珠，所述诱饵分子含有伯胺基团-NH₂，然后再将诱饵微珠与待测样品以及凝集素荧光探针在结合缓冲液中进行共孵育，最后利用流式细胞仪直接读取诱饵微珠的荧光信号，从而体现凝集素的亲和丰度，通过凝集素与糖基化的对应关系，得出靶分子的糖基化修饰情况。

2.根据权利要求1所述的一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将聚苯乙烯微球悬浮液与EDC和EDC交联反应基团混匀，于分子杂交仪中反应1-3h；

S2、除去上清后重悬微球，加入诱饵分子4℃避光孵育过夜，再除去上清重悬微球后制得诱饵微珠；

S3、在结合缓冲液中加入诱饵微珠、待测样品以及凝集素荧光探针，混匀后于分子杂交仪中分子杂交孵育1-2h；

S4、孵育后利用流式细胞仪进行分析，FSC/SSC圈选微球，分析平均荧光强度，通过凝集素与糖基化的对应关系，得出靶分子的糖基化修饰情况。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法，其特征在于，所述诱饵分子包括抗体、核酸、链亲和素、Protein-AGL。

4.根据权利要求1或2所述的一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法，其特征在于，所述EDC交联反应基团为sulfo-NHS。

5.根据权利要求1或2所述的一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法，其特征在于，所述聚苯乙烯微球为羧化聚苯乙烯微珠。

6.根据权利要求1或2所述的一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法，其特征在于，所述凝集素荧光探针包括ConA、DBA、PNA、RCA-1、SBA、UEA-1、WGA、DSL、ECL、GSL-Ⅱ、Jacalin、LEL、STL。

7.根据权利要求1或2所述的一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法，其特征在于，所述待测样品为血清或血浆。

8.根据权利要求1或2所述的一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法，其特征在于，所述结合缓冲液为LBB缓冲液，所述LBB缓冲液包括20mM HEPES,150mM NaCl,1mMCaCl₂,1mM MgCl₂,1mM MnCl₂,1mM ZnCl₂。

9.根据权利要求1或2所述的一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法，其特征在于，步骤S2孵育过夜后，利用BSA与微球室温孵育1-3h以封闭交联基团。