[发明专利]褐黄血蜱铁蛋白、基因及制备方法和应用

权利要求书

1.一种褐黄血蜱铁蛋白，其特征在于：包括氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示的Hf-FER1和氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示的Hf-FER2。

2.一种褐黄血蜱铁蛋白基因，其特征在于：包括编码如SEQ ID NO.8所示氨基酸序列的核苷酸序列和编码如SEQ ID NO.16所示氨基酸序列的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的褐黄血蜱铁蛋白基因，其特征在于：所述编码如SEQ ID NO.8所示氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述编码如SEQ ID NO.16所示氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。

4.一种重组表达载体，其特征在于：包括pET- Hf-FER1和pET- Hf-FER2，所述pET- Hf-FER1包含权利要求3中SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列，所述pET- Hf-FER2包含权利要求3中SEQ ID NO.15所示的核苷酸序列。

5.一种褐黄血蜱铁蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，从褐黄血蜱中提取总RNA；

S2，以褐黄血蜱总RNA为模板进行反转录，分别得到Hf-FER1的反转录cDNA和Hf-FER2的反转录cDNA；

S3，设计引物，以S2得到的反转录cDNA为模板进行PCR扩增，得到Hf-FER1基因和Hf-FER2基因；

S4，设计引物，分别以Hf-FER1基因和Hf-FER2基因为模板，以pGEMTM-T Easy为载体进行克隆，构建质粒TEasy-Hf-FER1和TEasy-Hf-FER2；

S5，将TEasy-Hf-FER1使用EcoR I和Sal I双酶切，酶切产物纯化后与载体pET-32a连接，转化到DH5 α感受态细菌，构建重组表达质粒pET- Hf-FER1；将测序正确的TEasy-Hf-FER2使用EcoR I和Not I双酶切，酶切产物纯化后与载体pET-32a连接，转化到DH5 α感受态细菌，构建重组表达质粒pET- Hf-FER2；

S6，将重组表达质粒pET- Hf-FER1和pET-Hf-FER2分别进行诱导表达；

S7，对诱导表达的褐黄血蜱铁蛋白进行纯化处理得到Hf-FER1重组蛋白和Hf-FER2重组蛋白。

6.根据权利要求5所述的褐黄血蜱铁蛋白的制备方法，其特征在于：所述S2包括以下具体步骤：

S21，以褐黄血蜱总RNA为模板进行反转录，分别合成5'-RACE和3'-RACE所需第一链cDNA模板；

S22，以5'-RACE cDNA和3'-RACE cDNA为模板，用如SEQ ID NO.1所示的序列、如SEQ IDNO.2所示的序列和UPM为引物，进行第一轮PCR扩增反应；

将第一轮PCR扩增的产物作为第二轮PCR扩增模板，用如SEQ ID NO.3所示的序列、如SEQ ID NO.4所示的序列和UPS为引物进行第二轮PCR扩增，分别得到Hf-FER1的5'-和3'-末端核苷酸序；

S23，以5'-RACE cDNA和3'-RACE cDNA为模板，用如SEQ ID NO.9所示的序列、如SEQ IDNO.10所示的序列和UPM为引物，进行第一轮PCR扩增；

将第一轮PCR扩增产物作为第二轮PCR扩增模板，用如SEQ ID NO.11所示的序列、如SEQID NO.12所示的序列和UPS为引物进行第二轮PCR扩增，分别得到Hf-FER1的5'-和3'-末端核苷酸序；

S24，将测序获得5'-和3'-末端核苷酸序列与unigenes进行拼接，得到Hf-FER1基因的全长cDNA和Hf-FER2基因的全长cDNA。

7.根据权利要求5所述的褐黄血蜱铁蛋白的制备方法，其特征在于：所述S4中，构建质粒TEasy-Hf-FER1的引物包括如SEQ ID NO.17所示的序列和如SEQ ID NO.18所示的序列；构建质粒TEasy-Hf-FER2的引物包括如SEQ ID NO.19所示的序列和如SEQ ID NO.20所示的序列。

8.权利要求1所述的褐黄血蜱铁蛋白或权利要求5-7任一项制备得到的褐黄血蜱铁蛋白在制备针对蜱类叮咬的疫苗中的应用。