[发明专利]一种生物羊膜的制备方法

说明书

本发明公开了一种微孔隙生物羊膜的制备方法，所述生物羊膜制作的具体步骤为：S1：获得产妇剖腹产后胎盘；S2：将上述S1获取的羊膜进行验收；S3：将上述S2的羊膜进行紫外灯照射灭菌；S4：将上述S3清洗后的羊膜进行冻干处理；S5：将上述S4冻干后的羊膜进行打孔处理；S6：羊膜与BMP‑2进行复合生物活性因子处理；S7：将上述S6的羊膜进行复合生物活性因子处理后，将其进行冻干处理；S8：将上述S7处理后的羊膜进行裁剪；S9：将上述S8处理后的羊膜进行辐照灭菌入成品库；通过对羊膜进行激光打孔处理，使得羊膜覆盖组织以外的外源性干细胞、细胞因子等生物活动物质可自由通过，有助于减轻瘢痕修复的同时促进肌腱修复重塑和腱骨愈合。

技术领域

本发明涉及羊膜制备领域，尤其涉及一种生物羊膜的制备方法。

背景技术

羊膜具有5层结构，分别是上皮细胞层、基底膜、致密层、纤维母细胞层和海绵层；研究表明羊膜具有以下特点：1、羊膜含有纤维粘连素、层粘连素、IV型胶原、硫酸乙酰肝素蛋白多糖以及其它一些蛋白多糖大分子和一些细胞生长因子如EGF、BFGF，能促进细胞黏附、迁移、增殖、分化等重要功能，羊膜基底膜易使上皮细胞移行长入，增强上皮细胞的黏附性，促进上皮的分化、增殖，阻止上皮细胞凋亡；2、羊膜具有抑制炎症的作用，羊膜中含有多种蛋白酶抑制剂，通过抑制相应的蛋白酶而发挥抗炎作用；3、羊膜具有抗粘连作用；4、羊膜富含IV、V型胶原，具有活跃的物质转运功能，具半透膜性质，可满足膜内细胞所需营养物质需要；5、因羊膜不表达HLA-A、B、C及DR抗原或β2微球蛋白，同时有无血管的基质，抗原性较低；同时，羊膜来源广泛，易于取材，因而其已应用于组织工程研究和临床使用；

现有的技术中，生物羊膜都是直接采用对剥离下来的羊膜进行表面处理后干燥，且现有的生物羊膜中并不添加任何细胞因子，不能使用在膝关节的交叉韧带的肌腱愈合中，现有的羊膜是一个整体，不能使膝关节的骨髓血与肌腱之间流动交联，会造成肌腱愈合不良的情况，且愈合后不能减弱骨质与肌腱之间的雨刷效应和蹦极效应，也不会增加肌腱的强度。

发明内容

本发明目的是提供一种生物羊膜的制备方法，可以解决上述问题。

本发明解决技术问题采用如下技术方案：一种生物羊膜的制备方法，所述生物羊膜制作的具体步骤为：

S1：通过符合伦理要求的志愿捐献获得产妇剖腹产后胎盘，胎盘供体应符合年龄25-35岁之间，且产妇无基础、妊娠期及围生期疾病，所述胎盘应获取产后1小时之内的新鲜胎盘组织，将羊膜剥离；

S2：将上述S1获取的羊膜进行验收，用PCR法检测乙肝病毒、丙肝病毒、艾滋病毒，合格后进入后续工序；

S3：将上述S2的羊膜进行紫外灯照射灭菌，灭菌后在洁净环境下将新鲜羊膜用工艺用水清洗除去血渍；

S4：将上述S3清洗后的羊膜置于冷冻干燥机工作室内预冻，再将其置于冷凝室内，打开真空泵将羊膜进行冻干处理；

S5：将上述S4冻干后的羊膜进行打孔处理；

S6：将上述S5打孔后的羊膜与BMP-2进行复合生物活性因子处理；

S7：将上述S6的羊膜进行复合生物活性因子处理后，将其置于冷冻干燥机工作室内预冻，再将其置于冷凝室内，打开真空泵将羊膜进行冻干处理；

S8：将上述S7处理后的羊膜进行裁剪，裁剪成所需尺寸，裁剪后进行包装；

S9：将上述S8处理后的羊膜进行辐照灭菌，辐照灭菌后，每批产品均需要做产品的无菌、内毒素、胶原蛋白含量等项目，均合格后入成品库。

可选的，所述S2与S3之间还可以将羊膜进行脱细胞处理，具体步骤为：

将经过S2处理后的羊膜浸泡在1％浓度的TritonX-100中振荡，然后加入0.25％胰酶或乙二胺四乙酸溶液中振荡孵育除去上皮细胞，处理后制得脱细胞羊膜。